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粪肠球菌_
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粪肠球菌

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粪肠球菌


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1. 适用范围

GB/T 34224-2017标准适用于食品、环境样品中屎肠球菌的检测,涵盖传统培养法(菌落形态观察、生化反应)和分子生物学方法(PCR技术)的应用场景[3]。

2. 核心检测方法

标准规定两种方法:
① 传统培养法:预培养后使用选择性培养基分离,结合革兰染色、生化试验(如胆汁七叶苷水解)鉴定;
② 分子生物学法:通过PCR扩增特定基因片段(如16S rRNA或毒力基因)进行快速检测[3]。

3. 检出限与定量限

传统培养法:最低检出限为1 CFU/g(或mL),定量范围10^2-10^7 CFU/g;PCR法灵敏度更高,可达10^1基因拷贝数/g[3]。

4. 质控样品要求

需设置阴性对照(无菌生理盐水)和阳性对照(标准菌株ATCC 29212),实验用水需符合GB/T 6682二级水标准,培养基每批需做无菌验证[3]。

5. 关键实验步骤

① 样品预处理:25g样品+225mL无菌生理盐水均质;
② 选择性增菌:36℃培养18-24小时;
③ 分离培养:使用哥伦比亚血琼脂平板划线;
④ 确证试验:包括PYR试验、45℃耐热性试验等[3]。

6. 特别说明

① 需在生物安全二级实验室操作;
② 粪肠球菌与屎肠球菌需通过阿拉伯糖发酵试验区分;
③ PCR检测需防止气溶胶污染,设置三重复实验[3]。

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