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RV沙门菌增菌液体培养基（颗粒）/用于沙门氏菌选择性增菌培养

HBKP4198-11

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250g

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RV沙门菌增菌液体培养基（颗粒）介绍：

用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养。

成分(g/L)：

大豆胨	4.5
六水合氯化镁	29.0
氯化钠	8.0
磷酸氢二钾	0.4
磷酸二氢钾	0.6
孔雀绿	0.036
pH值5.2 ± 0.2	25℃

培养基组分说明除了微生物生长必须的碳源、氮源外，还有孔雀绿和六水合氯化镁。孔雀绿的主要用途是抑制杀灭真菌、大肠菌群；六水合氯化镁的用途是抑制变形杆菌和大肠杆菌的生长。在这里，美国药典和欧洲药典并未说明不同培养基组分的混合顺序，但是中国药典明确了除了孔雀绿外，其他要先混合溶解，之后才加入孔雀绿，然后进行灭菌。原因是：孔雀绿为有毒的致癌物，尽量减少与之接触。不过，除了培养基生产企业，现在的药厂都是购买成品干粉或颗粒培养基，按照供应商的说明书，直接称取相应的干粉或颗粒重量，加入纯化水即可。另外，这里需要注意的是，与其他常用的培养基的灭菌条件121℃不同的是，该培养基灭菌温度为不超过115℃。那为什么会不一样呢，原因在于六水合氯化镁。六水氯化镁又名水氯石、结晶氯化镁、卤片、卤粉，英文名magnesium chloride hexahydrate，分子量203。常温下为无色单斜晶体，呈柱状或针状或片状，有苦味，密度1.56g/cm3，易溶于水和乙醇，在湿度较大时，容易潮解。在空气中加热分解：100℃时失去2分子结晶水；在110℃开始失去部分氯化氢而分解，强热转为氧氯化物；在熔点118℃时热熔分解，释放出HCl气体而变成氯氧化合物；高温下加热则分解为MgO和HCl。由上可知，该培养基不能用常规的121℃进行灭菌，所以药典规定了115℃灭菌。检验原理：大豆蛋白胨在培养基中作为基础营养物质，为细菌的生长提供所需的碳源、氮源、维生素以及一些矿物质等元素；氯化镁提供必需的离子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸盐作为培养基的缓冲剂。孔雀绿能够抑制非沙门氏菌的生长。

用法：

称取本品27.1g,加热搅拌溶解于1000ml纯化水中,分装试管,115℃高压灭菌20分钟,备用。

在RV沙门增菌液体培养基中，鼠伤沙门氏菌为浑浊；肠炎沙门氏菌为浑浊；

乙型副伤寒沙门菌为浑浊；大肠埃希氏菌为抑制或部分抑制；金黄色葡萄球菌为抑制。

RV沙门菌增菌液体培养基（颗粒）微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置30-35℃需氧培养18-24小时。

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一、适用范围

该培养基适用于药品、食品及临床样本中沙门氏菌的选择性增菌培养，通过低pH值、孔雀绿及氯化镁的协同作用抑制非目标菌生长，提升目标菌检出率。中国药典（2015版）与欧洲药典均明确其作为沙门氏菌检测的关键步骤[8][5]。

二、核心检测方法

基于选择性抑制原理：孔雀绿抑制革兰氏阳性菌及部分肠道菌群，氯化镁增强渗透压选择性，磷酸盐缓冲体系维持pH 5.2±0.2的酸性环境。中国药典规定需结合TSB预增菌后接种，42℃培养18-24小时[8][2]。

三、检出限与定量限

当接种量≤100 CFU时，乙型副伤寒沙门氏菌（CMCC(B)50094）在30-35℃培养18-24小时应达到与对照培养基相当的生长率，表明其检出限满足≤10 CFU/mL的灵敏度要求[1][8]。

四、质控样品要求

质控菌株需包括目标菌（如乙型副伤寒沙门氏菌）与非目标菌（如大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌）。目标菌应呈现浑浊生长，非目标菌需完全抑制或部分抑制，每批次培养基需进行生长率对比验证[1][8]。

五、关键实验步骤

1. 配制：称取27.1g干粉溶于1L纯化水，115℃灭菌15-20分钟（温度达到115℃后开始计时）
2. 接种：取TSB预增菌液0.1mL加入10mL RV培养基
3. 培养：42±1℃需氧培养18-24小时[3][7][8]

六、特别说明

灭菌温度需严格控制在≤115℃，因六水合氯化镁高温易分解。成品干粉培养基应验证D121℃值（通常按0.5min计），通过残存概率法计算生物负荷降低值（LR≥8）。pH值需在灭菌冷却至25℃后测定[3][7][8]。

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