“失准”了怎么办？标准品使用中的常见问题排查

作者：Nicebiochem

在实验室工作中，最令人沮丧的时刻之一，就是当你发现精心准备的实验，其数据出现了难以解释的偏差——校准曲线线性变差、质控样超限、样品结果与预期不符。此时，一个关键的“嫌疑人”就是实验的基准：标准品。它是否“失准”了？面对这种情况，我们不应慌张，而应像一位冷静的侦探，遵循一套系统的流程进行排查。

一、 红色警报：哪些现象提示标准品可能“失准”？

当出现以下情况时，我们应优先考虑标准品是否存在问题：

1. 校准曲线异常： 线性相关系数R²突然变差，或标准点回读精度超差。

2. 系统适用性失败： 色谱峰的理论塔板数、分离度或拖尾因子不达标。

3. 质控样漂移： 长期稳定的质控样结果出现系统性偏高或偏低。

4. 样品结果普遍异常： 整批样品的结果与历史数据或临床指征不符。

5. 仪器响应变化： 同一标准品的峰面积或响应值出现显著下降。

图：标准品问题排查决策树

二、 系统性排查：五大方向锁定问题根源

请按照从易到难的顺序，逐一检查以下环节：

方向一：标准品本身——“源头排查”

1. 有效期与储存条件：

o 检查： 是否已过期？是否严格按证书要求（-20°C、避光等）储存？

o 行动： 立即停用过期品。检查冰箱温度记录，确认无温度失控事件。

2. 物理状态观察：

o 检查（针对固体）： 是否吸潮、结块、变色或液化？

o 检查（针对液体）： 是否蒸发、浑浊、产生沉淀或出现菌膜？

o 行动： 任何物理状态的异常都强烈提示降解，应立即停用。

3. 批次变更：

o 检查： 是否刚刚更换了标准品的新批号？

o 行动： 新旧批号的标准品进行交叉比对测试。如果只有新批号出现问题，很可能与标准品本身或赋值差异有关。

方向二：配制过程——“操作排查”

这是最常见的问题高发区。

1. 称量误差：

o 检查： 天平是否近期经过校准？称量环境是否干燥（针对易吸湿品）？称量值是否在天平最佳量程内？

o 行动： 重新校准天平，规范称量操作。

2. 稀释错误：

o 检查： 稀释计算是否正确？是否使用了系列稀释且误差累积？移液器是否校准？

o 行动： 独立配制关键浓度点进行验证，检查移液器校准记录。

3. 溶剂与稳定性：

o 检查： 是否使用了正确的溶剂？配制好的储备液或工作液是否超过其开启后稳定期？

o 行动： 严格按证书要求选择溶剂，并对开启后的溶液明确规定和标注有效期。

方向三：仪器状态——“系统排查”

如果标准品本身和配制均无误，问题可能出在仪器上。

· 检查： 用该标准品测试仪器的基础性能：灵敏度是否下降？基线噪音是否增大？保留时间是否漂移？

· 行动： 进行全面的仪器维护（如清洗离子源、更换色谱柱、冲洗管路等），然后重新测试。

方向四：方法与环境——“干扰排查”

1. 基质效应：

o 检查： 是否使用纯溶剂标曲计算复杂基质样品？

o 行动： 使用基质匹配的标准品或加入同位素内标进行验证。

2. 污染与干扰：

o 检查： 空白实验中是否出现干扰峰？标准品容器是否洁净？

o 行动： 彻底清洗容器，检查试剂纯度。

方向五：人员操作——“最终排查”

· 检查： 是否为新员工操作？SOP是否被严格遵循？

· 行动： 安排有经验的人员进行重复实验，复核操作流程。

三、 终极验证：如何证实你的猜测？

当怀疑某一环节时，最直接的验证方法是 “替换法”：

· 怀疑旧标准品？ → 用全新未开封的同批号或新批号标准品重新配制测试。

· 怀疑配制过程？ → 请另一位同事独立配制同一标准品进行测试。

· 怀疑仪器？ → 用该标准品在另一台正常运行的同类仪器上测试。

四、 防患于未然：建立良好的管理习惯

绝大多数“失准”问题可以通过预防来避免：

1. 严谨管理： 建立标准品电子台账，严格监控有效期和储存条件。

2. 规范操作： 制定并严格执行标准品配制SOP。

3. 全程质控： 每批实验都必须随行质控样，实时监控数据质量。

4. 完善记录： 确保所有操作（称量、稀释、仪器条件）可完全追溯。

结论

当数据“失准”时，对标准品的排查不仅是一个技术过程，更是一种严谨科学思维的体现。它要求我们保持冷静，尊重数据，系统地审视从源头到结果的每一个环节。

掌握这套排查流程，不仅能帮助我们快速解决眼前的问题，更能培养我们预防问题的能力。最终，我们将从一个被动的数据使用者，成长为主动的流程控制者和问题解决者，这正是专业实验室技术人员核心价值的体现。