pRSETA
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产品中文名称：pRSETA
产品英文名称：pRSETA
参考用途：主要用于大肠杆菌蛋白表达
形态特性：/
培养基：酵母膏：5.0g，蛋白胨：10.0g，NaCl：10.0g，pH：7.0(25℃)
培养条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5a）
培养方法：1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min； 2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min； 3.热激导入： 42℃静置 90s； 4.收缩膜孔： 冰浴 2min； 5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min； 6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。 7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
存储形式：2-8℃
提供形式：质粒干粉
备注：pRSET A载体是从pUC的载体衍生而来，载体设计的目的是为了在大肠杆菌中高水平的表达和纯化目的克隆基因。载体上的T7启动子使得pRSETA载体高水平表达克隆的基因序列成为可能。此外，DNA插入片段的位于载体上面的下游侧，并能够上游的蛋白编码框相一致，上游的编码序列表达了一个N-端融合的肽。该序列包括一个ATG翻译起始密码子，一个6 X His标签，一个来源于噬菌体T7基因10的转录稳定序列，Xpress抗原表位，以及一个肠激酶裂解识别序列。His 标签允许简单的Ni柱蛋白纯化。肠激酶识别位点位于His标签和重组蛋白之间，可以随后方便的去除重组蛋白的N-端的融合肽。
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