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粪大肠菌群阴性对照质控样品 (多管发酵法HJ 347.2-2018)_
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粪大肠菌群阴性对照质控样品 (多管发酵法HJ 347.2-2018)

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粪大肠菌群阴性对照质控样品 (多管发酵法HJ 347.2-2018)介绍:


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标准名称及标准号
HJ 347.2-2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法
(代替原HJ/T 347-2007标准)
适用范围
适用对象 地表水、地下水、生活污水及工业废水
(不适用于浑浊度>500 NTU或含余氯的水样)
核心检测方法
多管发酵法原理 1. 初发酵:样品在乳糖蛋白胨培养液(36±1℃,24h)中产酸产气
2. 复发酵:阳性管转接EC培养液(44.5±0.5℃,24h)
3. 根据产气管数查MPN表计算浓度
检出限与定量范围
检出特性 1. 报告单位:MPN/L(最大可能数/升)
2. 最低检出浓度:3 MPN/L(接种100mL×1,10mL×10,1mL×10)
3. 定量范围:3~240000 MPN/L
质控样品要求
阴性对照 1. 每批次需做阴性对照
2. 使用无菌蒸馏水替代样品
3. 要求:所有发酵管均无产气现象
4. 失控处理:当出现阳性结果时,该批次数据无效
阳性对照 1. 推荐使用大肠埃希氏菌(ATCC 25922)
2. 浓度要求:50~200 CFU/mL
3. 回收率控制范围:70%~130%
关键实验步骤
样品接种 1. 按水样污染程度选择稀释梯度
2. 接种量组合示例:100mL×5管, 10mL×5管, 1mL×5管
3. 每管加等量双倍浓度乳糖蛋白胨培养液
培养观察 1. 初发酵培养:(36±1)℃培养(24±2)h
2. 产气识别:杜氏小管有连续气泡或培养液溢出
3. 复发酵转接:产气管全部转接EC培养液
结果判定 1. 复发酵培养:(44.5±0.5)℃水浴(24±2)h
2. 产气管判定为粪大肠菌群阳性
3. 按阳性管组合查附录MPN表
特别说明
温度控制 1. 复发酵温度必须严格控制在44.5±0.5℃
2. 建议使用恒温水浴槽(优于培养箱)
3. 每日使用校准温度计验证水温
干扰消除 1. 含余氯水样:采样后立即加入硫代硫酸钠
2. 高浊度水样:静置30min取上清液检测
3. 强酸性水样:用NaOH调节pH至6.5~7.5
时效要求 1. 采样到检测间隔:≤6h(2-10℃冷藏)
2. 稀释水样应在30min内完成接种
3. 培养液开封后冷藏保存≤2周

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