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生孢梭菌_
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生孢梭菌

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生孢梭菌


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一、适用范围

适用于药品、生物制品及医疗器具的无菌检查中厌氧菌(生孢梭菌)的检测与质控,涵盖培养基灵敏度验证、菌种复苏培养及微生物限度检查等场景[2][5]。

二、核心检测方法

1. 硫乙醇酸盐流体培养基(FTM)法:通过氧化层深度控制氧分压,观察菌体在培养基中分层生长特性
2. 庖肉培养基法:液体石蜡隔绝氧气,直接观察菌体代谢产生的气体与浑浊度变化
3. 哥伦比亚琼脂平板法:需配合厌氧培养装置,通过菌落形态特征进行鉴定[2][5]

三、检出限与定量限

1. FTM法灵敏度:≤10 CFU/mL(需氧/厌氧条件下均能检出)
2. 平板计数法定量限:50-100 CFU/平板,需在厌氧条件下培养24-48小时
3. 液体培养基稀释法:可检测至10⁻⁶稀释度的活菌存在[2][5]

四、质控样品要求

1. 标准菌株来源:CMCC(F)98001等权威保藏机构认证菌株
2. 传代要求:工作菌株传代不超过5代,冻干粉启封后需进行纯度验证
3. 活性验证:每次实验需同步进行阳性对照试验[5][8]

五、关键实验步骤

1. 厌氧环境建立:使用厌氧罐/袋配合厌氧产气包,确保氧气残留<1%
2. 菌液制备:冻干菌种复苏后需连续转接培养≥2次
3. 培养观察:35-37℃培养18-24小时,观察特征性恶臭味产生
4. 结果判读:FTM培养基需观察到明显的混浊和还原层上移现象[2][5]

六、特别说明

1. 氧气敏感性:暴露于空气中超过30分钟会导致菌体失活
2. 保存要求:长期保存需使用甘油管-80℃冻存,避免反复冻融
3. 生物安全:操作应在生物安全柜中进行,接触菌液后需121℃高压灭菌30分钟[2][5][8]

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