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大肠杆菌动fliC基因检测质粒DNA标准物质

GBW(E)100461

Plasmid DNA Reference Materials for Diarrheagenic Escherichia coli fliC Gene Detection

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透明塑料离心管

萘析精选

71.3【质量浓度(ng/μL)】/不确定度：6.8

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NIM-RM3512 | 正十四烷， 304ng/uL，相对扩展不确定度3%；正十五烷， 305ng/uL，相对扩展不确定度3%；正十六烷， 304ng/uL，相对扩展不确定度3%；

大肠杆菌动fliC基因检测质粒DNA标准物质介绍：

使用注意事项：使用前于室温平衡30 min，然后轻轻打开瓶盖，用经过校准的A级移液管/器准确量取本标准物质。工作标准物质一旦打开，请在短期内使用完毕。
特征形态：固态
主要分析方法：紫外分光光度法#高分辨电感耦合等离子体质谱法（HR-ICP-MS）
定值单位：上海市计量测试技术研究院
规格：透明塑料离心管
定级证书量值信息：

	标准值	相对不确定度(%)	单位	CAS	备注
大肠杆菌动fliC基因检测质粒DNA	71.3	6.8	质量浓度(ng/μL)

保存条件：置于干燥、-15C ~-20C条件下保存
研制单位名称：上海市计量测试技术研究院

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本公司销售的所有产品仅供实验科研使用，不用于人体及临床诊断。

国家标准与行业标准解读

标准名称	GB/T 19438.1-2004《动物源性食品中致病菌分子生物学检测方法第1部分：大肠杆菌O157:H7检测》
适用范围	适用于食品、环境样本及临床样本中大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测，包括fliC基因的特异性鉴定。
核心检测方法	基于PCR技术扩增fliC基因片段，结合电泳分析确认目标序列，用于区分致病性大肠杆菌与非致病性菌株。
检出限与定量限	检出限为10 CFU/g（样本），定量限需通过标准曲线法确定，推荐使用质粒DNA标准物质进行校准。
质控样品要求	需包含阳性对照（含fliC基因的质粒DNA）、阴性对照（非目标菌DNA）及空白对照，确保实验特异性。
关键实验步骤	1. DNA提取与纯化 2. PCR扩增（引物设计参考标准附录） 3. 琼脂糖凝胶电泳分析 4. 结果判读（需排除非特异性扩增）
特别说明	实验人员需具备分子生物学操作资质，避免气溶胶污染；检测结果需结合表型试验（如血清学分型）综合判定。

行业标准解读

标准名称	SN/T 1870-2016《食品中致病菌实时荧光PCR检测方法》
适用范围	适用于食品中大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的快速检测，支持fliC基因实时荧光定量分析。
核心检测方法	采用TaqMan探针法进行实时荧光PCR，通过Ct值定量目标基因拷贝数，提升检测灵敏度与时效性。
检出限与定量限	检出限为5拷贝/反应，定量限为20拷贝/反应，需使用梯度稀释的质粒DNA标准物质验证线性范围。
质控样品要求	需包含内标（如IPC基因）监控抑制物干扰，标准物质需覆盖检测动态范围（10^1-10^6拷贝/μL）。
关键实验步骤	1. 样本前处理与DNA提取 2. 实时荧光PCR反应体系配制 3. 扩增程序设置（退火温度参考引物Tm值） 4. 数据分析（阈值设定与标准曲线生成）
特别说明	实验环境需符合生物安全二级要求；当Ct值处于灰区时，需重复检测或结合其他方法确认。

国家标准解读

标准名称	GB 4789.38-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数》
适用范围	适用于食品中大肠埃希氏菌的定量检测，包含fliC基因检测作为分型辅助手段。
核心检测方法	基于平板计数法与分子生物学方法结合，通过fliC基因鉴定区分不同血清型大肠杆菌。
检出限与定量限	平板法检出限为1 CFU/g，分子方法需参照配套标准物质确定定量限。
质控样品要求	需使用已知浓度的活菌标准物质进行方法验证，确保培养条件与目标菌生长特性一致。
关键实验步骤	1. 样本均质与稀释 2. 选择性培养基培养 3. 可疑菌落分离与纯化 4. PCR确认fliC基因存在
特别说明	检测结果需结合培养特性与分子检测结果，避免漏检变异菌株；实验废弃物需高压灭菌处理。

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