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生化鉴定法:通过氧化酶阴性、触酶阳性、硝酸盐还原阴性等特性进行初步筛选[3]。
分子检测法:采用荧光定量PCR技术,针对16S rRNA或特异性基因片段进行快速鉴定[6]。
培养法:最低检出限为102 CFU/mL(血平板或麦康凯培养基)[3]。
荧光定量PCR:定量限为101~103 copies/μL(需验证引物特异性)[6]。
阳性对照:使用ATCC 19606(鲍曼不动杆菌标准菌株)验证检测体系准确性。
阴性对照:需包含大肠埃希菌(ATCC 25922)等非目标菌以排除交叉反应[3][6]。
样本前处理:临床样本需在30分钟内接种于血平板,35℃需氧培养18~24小时[3]。
核酸提取:采用蛋白酶K裂解法提取DNA,确保A260/280比值为1.8~2.0[6]。
鲍曼不动杆菌在42℃环境下仍可生长,此特性可用于区分其他不动杆菌属菌种[3];荧光定量PCR需设置熔解曲线分析以避免非特异性扩增[6]。
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不动杆菌属
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1. 适用范围
2. 核心检测方法
生化鉴定法:通过氧化酶阴性、触酶阳性、硝酸盐还原阴性等特性进行初步筛选[3]。
分子检测法:采用荧光定量PCR技术,针对16S rRNA或特异性基因片段进行快速鉴定[6]。
3. 检出限与定量限
培养法:最低检出限为102 CFU/mL(血平板或麦康凯培养基)[3]。
荧光定量PCR:定量限为101~103 copies/μL(需验证引物特异性)[6]。
4. 质控样品要求
阳性对照:使用ATCC 19606(鲍曼不动杆菌标准菌株)验证检测体系准确性。
阴性对照:需包含大肠埃希菌(ATCC 25922)等非目标菌以排除交叉反应[3][6]。
5. 关键实验步骤
样本前处理:临床样本需在30分钟内接种于血平板,35℃需氧培养18~24小时[3]。
核酸提取:采用蛋白酶K裂解法提取DNA,确保A260/280比值为1.8~2.0[6]。
6. 特别说明
鲍曼不动杆菌在42℃环境下仍可生长,此特性可用于区分其他不动杆菌属菌种[3];荧光定量PCR需设置熔解曲线分析以避免非特异性扩增[6]。
以上信息仅供参考,请以相应标准的原文为准!