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卵黄琼脂培养基/用于肉毒梭菌的分离培养

HB9007-1

Egg Yolk Agar Medium

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250g

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卵黄琼脂培养基介绍：

用途：用于肉毒梭菌的分离培养。

添加剂：每瓶需配套添加 14盒 HB8295 50%卵黄乳液使用，每支添加于33.3ml卵黄琼脂培养基中。

成分（g/L）:

酵母浸粉	5.0
胰胨	5.0
月示胨	20.0
氯化钠	5.0
琼脂	20.0
pH值7.0±0.2	25℃

检验原理：酵母粉、胰胨、月示胨提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂为凝固剂；50%的卵黄乳液中的卵黄含有卵磷脂，而含卵磷脂酶的细菌可分解卵磷脂，在菌落周边培养基上形成不溶性、不透明的混浊带。

用法：

称取本品55.0g,加热煮沸溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶,每瓶100ml,121℃高压灭菌15分钟,冷至50℃左右时,每100ml 培养基中加入50%卵黄乳液15ml,混匀,倾入无菌平皿,备用。

产气荚膜梭菌在卵黄琼脂培养基上的生长特征：

扁平、边缘不规则，在菌落周围形成乳色沉淀晕圈

卵黄琼脂培养基微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置35±1℃厌氧培养48小时。

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中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验产气荚膜梭菌检验

适用范围

本标准适用于食品及中毒样品中产气荚膜梭菌的分离、鉴定及计数，特别针对其卵磷脂酶活性检测[2]。

核心检测方法

采用卵黄琼脂平板法：产气荚膜梭菌通过分解卵磷脂形成乳白色混浊环，结合厌氧培养特性进行鉴定[2][5]。

检出限与定量限

检出限为1 CFU/g，定量限为10 CFU/g，需通过梯度稀释法验证[2]。

质控样品要求

使用唐菖蒲伯克霍尔德氏菌CICC10574作为阳性对照，需在36±1℃培养2-4天，出现虹彩现象及乳浊环[2]。

关键实验步骤

1. 基础培养基制备：肉浸液1000mL+蛋白胨15g+氯化钠5g+琼脂25-30g，121℃灭菌15分钟
2. 添加50%卵黄盐水悬液（10-15mL/100mL培养基），50℃混合后倾注平板[1][5]
3. 样品划线接种后36±1℃厌氧培养24小时

特别说明

卵黄悬液需无菌制备：鲜蛋经70%乙醇浸泡1小时后取卵黄，与生理盐水等体积混合，4℃保存备用[5]。

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