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5-甲基胞嘧啶

DJ0221-0100

5-Methylcytosine

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554-01-8

100mg/支

乐美天

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5-甲基胞嘧啶介绍：

5-甲基胞嘧啶

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本公司销售的所有产品仅供实验科研使用，不用于人体及临床诊断。

标准名称及标准号

GB/T 34782-2017 《核酸中5-甲基胞嘧啶的测定高效液相色谱法》

适用范围

适用于动植物组织、细胞、血液等生物样本中DNA或RNA的5-甲基胞嘧啶含量检测，检测对象为基因组或特定核酸片段。

核心检测方法

采用高效液相色谱法（HPLC），通过酶解核酸生成单核苷酸，色谱柱分离后检测5-甲基胞嘧啶与未修饰胞嘧啶的峰面积比值，计算甲基化水平。

检出限与定量限

检出限（LOD）为0.01%（甲基化比例），定量限（LOQ）为0.05%。需通过标准曲线验证线性范围（0.05%~20%）。

质控样品要求

每批次实验需包含空白对照、低浓度（0.1%甲基化）和高浓度（10%甲基化）质控品，回收率应控制在85%~115%，相对标准偏差（RSD）≤10%。

关键实验步骤

1. 核酸纯化与酶解：使用核酸酶P1和碱性磷酸酶水解DNA至单核苷酸；
2. 色谱条件：C18反相色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液-甲醇梯度洗脱；
3. 检测波长：275 nm紫外检测。

特别说明

1. 需避免RNA样本中核糖核苷酸干扰，建议使用DNase-free酶体系；
2. 色谱柱需定期用高比例甲醇冲洗以去除残留；
3. 若样本甲基化水平低于LOQ，需采用预浓缩或质谱法补充验证。

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