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黄牛源性成分分析质控样品_
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黄牛源性成分分析质控样品

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黄牛源性成分分析相关标准解读
标准名称及标准号 GB/T 21106-2007 动物源性饲料中牛源性成分定性检测方法 PCR方法
适用范围 适用于动物源性饲料和饲料添加剂中牛源性成分的定性检测,包括黄牛、水牛等牛属动物成分的鉴别。特别适用于肉骨粉、动物油脂等深加工产品的成分溯源分析
核心检测方法
PCR扩增法:
1. 采用CTAB法提取样品DNA
2. 使用牛特异性引物进行PCR扩增
3. 扩增目标:线粒体细胞色素b基因片段(271bp)
4. 琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物
5. 紫外凝胶成像系统分析结果
检出限与定量限
• 方法检出限:0.1%(质量分数)
• DNA最低检出量:20pg/μL
• 定量要求:本标准为定性检测方法,不设定量限,阳性结果需通过重复实验确认
质控样品要求
必须包含三类质控样品:
1. 阳性对照:已知牛源性成分的标准物质
2. 阴性对照:明确不含牛成分的样品
3. 空白对照:不含DNA模板的PCR反应体系
• 质控样品应与待测样品同步处理
• 每批次检测需设置双平行样
关键实验步骤
1. 样品前处理:粉碎过40目筛,称取500mg样品
2. DNA提取:CTAB法裂解细胞,氯仿-异戊醇抽提,异丙醇沉淀DNA
3. PCR体系:25μL反应体系含:10×Buffer 2.5μL,dNTPs 0.2mM,引物各0.4μM,Taq酶1.5U
4. 扩增程序:94℃预变性5min;35循环(94℃ 30s, 60℃ 30s, 72℃ 30s);72℃延伸7min
5. 电泳分析:2%琼脂糖凝胶,100V电压,EB染色后紫外观察
特别说明
• 需在独立PCR实验室操作,严格分区管理(试剂准备区、样品处理区、扩增区)
• 高温加工样品DNA易降解,需增加模板量至1000mg
• 当出现非特异性条带时,需通过测序确认结果
• 本方法不适用于区分黄牛、水牛等牛属内不同物种
• 每6个月需进行方法学验证

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