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绵羊源性成分分析质控样品_
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绵羊源性成分分析质控样品

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国家标准解读:
标准名称及标准号 饲料中牛羊源性成分的定性检测 定性聚合酶链式反应(PCR)法
GB/T 20190-2006
适用范围 1. 适用于动物饲料、饲料添加剂及宠物饲料中牛羊源性成分的定性检测
2. 可特异性检测绵羊、山羊等反刍动物源性成分
3. 不适用于热加工导致DNA严重降解的样品(温度>120℃或时间>60min)
核心检测方法
PCR扩增技术
1. 基于线粒体DNA的种属特异性引物设计
2. 引物序列:
  • 上游:5'-CAT TAT CGC TCA AAC TAA TCA-3'
  • 下游:5'-GTG TGA TAT TTA TTA GAT GGG-3'
3. 扩增产物长度:271bp(牛羊共有片段)
检出限与定量限
定性检出限
1. 最低检出含量:0.1%(质量分数)
2. 灵敏度:可检测样品中1%的绵羊源性成分
3. 特异性要求:不与猪、鸡、马等其他动物DNA发生交叉反应
质控样品要求
必须包含的对照体系
1. 阳性对照:已知含绵羊源性成分的标准物质
2. 阴性对照:不含动物源性成分的植物基质
3. 空白对照:无菌超纯水替代DNA模板
4. 内参对照:使用通用引物验证DNA提取质量
关键实验步骤 1. DNA提取:CTAB法或等效试剂盒,OD260/OD280应为1.7-1.9
2. PCR反应体系
  • Taq DNA聚合酶:1.5U
  • dNTPs:200μmol/L
  • 引物:各0.5μmol/L
3. 扩增程序
  • 预变性:94℃ 5min
  • 35循环:94℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s
  • 终延伸:72℃ 5min
4. 电泳检测:2%琼脂糖凝胶,100V 30min
特别说明 1. 实验室分区要求:样品处理、PCR配制、扩增产物分析必须独立区域
2. 防污染措施:使用UNG酶防产物污染,定期用10%次氯酸钠消毒
3. 结果判定:阳性对照出现271bp条带,阴性/空白对照无条带时
  • 样品出现271bp条带:检出牛羊源性成分
  • 无条带:未检出
4. 基质干扰处理:油脂含量>10%样品需增加氯仿脱脂步骤

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