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无细胞蛋白表达 氨基酸混标-13C;15N同位素|CELL FREE AMINO ACID MIX (20 AA)介绍:

产品类型:标准物质(RM)-纯品型
产品品牌:CIL

您正在浏览的产品:无细胞蛋白表达 氨基酸混标-13C;15N同位素|CELL FREE AMINO ACID MIX (20 AA)

手机版:无细胞蛋白表达 氨基酸混标-13C;15N同位素|CELL FREE AMINO ACID MIX (20 AA)

本公司销售的所有产品仅供实验科研使用,不用于人体及临床诊断。

生物样品中氨基酸的测定 液相色谱-串联质谱法
标准名称及标准号 GB/T 30987-2014《生物样品中氨基酸的测定 液相色谱-串联质谱法》
适用范围 适用于血清、血浆、细胞裂解液等生物样品中20种氨基酸的定量分析,包括同位素标记氨基酸的检测
核心检测方法 同位素稀释-液相色谱串联质谱法(ID-LC-MS/MS)。使用13C/15N标记氨基酸作为内标,通过质荷比差异实现目标氨基酸的精准定量
检出限与定量限 游离氨基酸检出限0.05-0.5 μmol/L,定量限0.1-1.0 μmol/L(具体取决于氨基酸种类及仪器灵敏度)
质控样品要求 1. 每批次需包含空白样品、加标样品
2. 同位素内标回收率需控制在85%-115%
3. 同位素标记物纯度≥95%
关键实验步骤 1. 样品前处理:蛋白沉淀(乙腈/甲醇)
2. 同位素内标添加:在样品预处理前加入混标
3. 色谱分离:C18色谱柱,梯度洗脱(0.1%甲酸水/乙腈)
4. 质谱检测:多反应监测模式(MRM)采集数据
特别说明 同位素标记物需验证同位素丰度(≥97%)及化学纯度,防止未标记氨基酸干扰
同位素标记物化学纯度的测定 高效液相色谱法
标准名称及标准号 GB/T 35876-2018《同位素标记物化学纯度的测定 高效液相色谱法》
适用范围 规范13C、15N等稳定同位素标记化合物(包括氨基酸)的纯度检测方法
核心检测方法 高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV),通过保留时间定性,峰面积归一化法计算化学纯度
检出限与定量限 杂质检出限0.1%(信噪比≥3),定量限0.3%(信噪比≥10)
质控样品要求 1. 需使用标准品验证色谱系统适用性
2. 重复进样RSD≤1.5%
3. 标样回收率98%-102%
关键实验步骤 1. 色谱柱选择:亲水性C18或HILIC柱
2. 流动相:磷酸盐缓冲液(pH2.5)-乙腈体系
3. 检测波长:210nm(氨基酸特征吸收)
4. 柱温控制:30±1℃
特别说明 需验证同位素标记物与未标记物的色谱分离度(≥1.5),确保纯度检测准确性
蛋白质组学样本制备规范
标准名称及标准号 GB/T 32465-2015《蛋白质组学样本制备规范》
适用范围 无细胞蛋白表达系统等体外合成蛋白质的样品前处理流程标准化
核心检测方法 规范同位素标记蛋白样本的制备流程,包括标记氨基酸添加浓度、反应终止方法、蛋白沉淀/离心参数
关键质控点 1. 同位素掺入率≥95%
2. 蛋白回收率≥90%
3. 样品保存:-80℃避光(防止氨基酸降解)
样品处理要求 1. 标记氨基酸工作液浓度:标准0.2-0.5 mM
2. 反应终止:立即置于冰上并添加蛋白酶抑制剂
3. 除盐处理:超滤离心(截留分子量3kDa)
特别说明 需监控无细胞体系中游离氨基酸浓度变化,确保同位素标记效率

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