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氘代无细胞蛋白表达 氨基酸混标-U-D同位素|CELL FREE AMINO ACID MIX (20 AA)介绍:

产品类型:标准物质(RM)-纯品型
产品品牌:CIL

您正在浏览的产品:氘代无细胞蛋白表达 氨基酸混标-U-D同位素|CELL FREE AMINO ACID MIX (20 AA)

手机版:氘代无细胞蛋白表达 氨基酸混标-U-D同位素|CELL FREE AMINO ACID MIX (20 AA)

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相关国家标准解读
标准名称及标准号 GB/T 33648-2017 生物样品中氨基酸的测定 液相色谱-串联质谱法
适用范围 适用于生物样品(血清、尿液、组织等)中20种蛋白氨基酸的定量分析,特别注明可使用稳定同位素标记氨基酸(如氘代氨基酸)作为内标物质校正基质效应和回收率
核心检测方法 1. 同位素稀释质谱法(IDMS)原理
2. 氘代氨基酸作为内标加入样品
3. 液相色谱分离(C18色谱柱,梯度洗脱)
4. 串联质谱检测(MRM多反应监测模式)
检出限与定量限 血清样品:
- 检出限(LOD):0.05-0.5 μmol/L
- 定量限(LOQ):0.2-2.0 μmol/L
(氘代内标使用可将定量限降低30-50%)
质控样品要求 1. 每批次含空白基质对照
2. 低/中/高浓度质控样(含同位素内标)
3. 内标响应偏差≤±20%
4. 同位素内标纯度≥98%
5. 同位素标记位置需避开代谢位点
关键实验步骤 1. 样品前处理:蛋白沉淀(乙腈)
2. 精确加入氘代氨基酸混标(预冷至4℃)
3. 离心后取上清液氮吹浓缩
4. 流动相复溶后进样
5. 色谱条件:0.1%甲酸水/乙腈梯度洗脱
6. 质谱参数优化(DP/CE电压)
特别说明 1. 氘代氨基酸需避光保存于-80℃
2. 同位素标记需验证无交叉干扰(如亮氨酸-d3与异亮氨酸)
3. 注意氘代试剂在电喷雾源中的离子抑制效应
4. 无细胞体系需验证基质效应对回收率影响
标准名称及标准号 GB/T 37864-2019 生物样品中蛋白质稳定同位素标记的测定
适用范围 规范同位素标记蛋白质/氨基酸在定量蛋白质组学中的应用,包括无细胞表达系统中蛋白质合成速率的同位素标记检测
核心检测方法 1. 脉冲式同位素标记技术
2. 氨基酸代谢标记法(SILAC)
3. 标记效率的质谱评估方法
4. 同位素丰度比计算规范
关键实验步骤 1. 标记培养基配制(氘代氨基酸浓度优化)
2. 标记时间梯度设计(5min-24h)
3. 酶解肽段分离(SCX色谱)
4. 高分辨质谱全扫描检测
5. 同位素分布模式分析
质控要求 1. 标记效率≥95%
2. 同位素内标保留时间偏差≤0.1min
3. 质量精度≤5 ppm
4. 同位素丰度比RSD≤15%
特别说明 1. 需监控同位素交换反应
2. 无细胞体系中需优化ATP再生系统
3. 注意氘标记对蛋白质折叠的影响
4. 推荐使用U-D型(全氘代)氨基酸避免代谢分流

以上信息仅供参考,请以相应标准的原文为准!