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鸡支原体培养基添加剂/每1000ml鸡支原体培养基添加1支鸡支原体培养基添加剂

HBYM329-1a

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鸡支原体培养基添加剂介绍：

用法

将灭菌后的鸡支原体培养基冷却至45℃以下时，每1000mL培养基加入1支鸡支原体培养基添加剂1和1支鸡支原体培养基添加剂2及100mL无菌马血清。

储存条件：

-10~-20℃冷冻保存，有效期为1年。

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本公司销售的所有产品仅供实验科研使用，不用于人体及临床诊断。

一、适用范围

适用于鸡滑液支原体及其他禽支原体的分离培养、增殖及疫苗制备，满足《中国兽药典》对支原体培养的基础要求。培养基需提供氨基酸、脂类及辅助因子等营养，支持支原体高效生长[6]。

二、核心检测方法

1. 液体培养法：用于增菌培养及疫苗生产，通过培养基颜色变化（如改良Frey氏液体培养基由红变黄）判断支原体对数生长期[6][8]。
2. 固体培养法：用于菌落分离与计数，采用脑心琼脂等基础培养基结合抗生素抑制杂菌[6][7]。

三、检出限与定量限

1. 检出限：液体培养基中支原体活菌浓度需≥1.0×10⁶ CFU/mL方可判定为有效增殖[3][8]。
2. 定量限：疫苗生产用菌液活菌滴度需≥1.0×10⁹ CCU/mL，低于此标准需浓缩处理[3][6]。

四、质控样品要求

1. 基础成分：含猪肺消化汤、水解乳蛋白胨、酵母浸出液等，血清添加量≤10%以减少异源蛋白干扰[6][10]。
2. 抗生素控制：头孢噻吩、万古霉素等需验证对支原体无抑制，避免影响疫苗效力[2][5][6]。

五、关键实验步骤

1. 配制：按比例称量基础培养基（如47.4g/1000ml水），加热溶解后调pH至7.4±0.2，加入无菌马血清及辅酶I等添加剂[6][7]。
2. 灭菌：121℃高压湿热灭菌15分钟，分装后冷至45℃添加热敏性成分（如青霉素）[6][7][10]。
3. 接种与培养：菌液稀释至1×10⁶ CFU/mL，30-37℃培养至培养基变色，定期观察菌体生长[6][8]。

六、特别说明

1. 血清替代：低血清配方可减少疫苗过敏风险，建议采用≤10%血清添加量[3][6]。
2. 稳定性验证：培养基灭菌后需进行无菌试验及支原体促生长能力测试[6][7]。
3. 临床分离限制：初次分离需7-12天，建议结合PCR等分子检测提高诊断效率[3][6]。

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