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菌种鉴定服务

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鉴定

北纳生物/BNCC

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菌种鉴定服务介绍：

产品中文名称：菌种鉴定服务
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参考用途：一代测序，提供鉴定报告
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本公司销售的所有产品仅供实验科研使用，不用于人体及临床诊断。

标准名称及标准号
GB/T 38580-2020《微生物诱变育种技术规范》

适用范围
适用于工业微生物（细菌、放线菌、酵母、霉菌等）的诱变育种操作流程和技术要求，包括： • 实验室诱变育种程序 • 突变株筛选方法 • 遗传稳定性验证 • 菌种保藏规范

核心检测方法

1. 表型鉴定法：
• 形态学观察（菌落/细胞形态）
• 生理生化试验（碳源利用、酶活性等）

2. 基因型鉴定法：
• 16S rRNA/ITS序列分析
• rep-PCR指纹图谱
• 多位点序列分型(MLST)

3. 功能验证法：
• 特定代谢产物检测
• 抗逆性实验
• 产酶能力定量分析

质控样品要求

1. 阳性对照菌株：
• 使用ATCC/CMCC标准菌株
• 需提供溯源证书
• 传代不超过5代

2. 阴性对照设置：
• 无菌培养基对照
• DNA提取空白对照
• PCR扩增阴性对照

3. 平行样品：
• 每批次样品≥3个平行
• 变异系数需≤10%

关键实验步骤

1. 样本前处理：
• 纯培养物需经24h新鲜培养
• 复杂样本需进行梯度稀释分离

2. DNA提取：
• 使用机械破壁法（珠磨）或酶解法
• DNA纯度要求A260/A280=1.8-2.0

3. PCR扩增：
• 引物选择：细菌用27F/1492R
• 真菌用ITS1/ITS4
• 退火温度需经梯度优化

4. 序列分析：
• 使用BLAST比对NCBI数据库
• 相似度≥99%可确认种水平
• 构建系统发育树验证

特别说明

1. 近缘种鉴别：
• 芽孢杆菌属需补充gyrB基因测序
• 乳酸菌需进行pheS基因分析

2. 混合菌群处理：
• 需先进行平板分离纯化
• 单菌落经革兰染色确认纯度

3. 结果报告要求：
• 需包含鉴定置信度评价
• 提供系统发育树拓扑图
• 注明使用数据库版本

4. 生物安全：
• 危险度2级以上菌株需在BSL-2实验室操作
• 废弃物需121℃灭菌30分钟

检出限与定量限

1. 培养法：
• 最低检出限：1 CFU/平板
• 定量范围：30-300 CFU/平板

2. qPCR法：
• 检测限：10² 基因拷贝/反应
• 定量限：10³ 基因拷贝/反应
• R²需≥0.990

3. 测序法：
• 最低DNA量：1 ng/μL
• 测序深度：≥100×覆盖度

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