Indigotine
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Indigotine
BePure-23517-250mg | 250mg
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Indigotine
BePure-23517-10mg | 10mg
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Indigotine
1ST2423-500mg | 500mg
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Indigotine
促BePure-23517-5g | 5g
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Indigotine
BW0726 | 5mL
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Indigotine
BW0726-1 | 5mL
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靛蓝胭脂红|Indigotine Indigotine
DRE-C14289000 | 250mg
GB 5009.35-2023食品中11种合成着色剂的测定应用
来源与性质：合成色素即人工合成的色素，色泽鲜艳，着色力强，色调多样，但它有一个大缺点，即具毒性（包括毒性、致泻性和致癌性）。这些毒性源于合成色素中的砷、铅、铜、苯酚、苯胺、乙醚、氯化物和硫酸盐，它们对人体均可造成不同程度的危害。中国允许在食品中添加的合成色素共计28种，有机合成色素有苋菜红、胭脂红、柠檬黄、新红、赤藓红、诱惑红、日落黄、亮蓝和靛蓝及其铝色淀，喹啉黄、酸性红。
法规与标准：GB 2760-2024《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》中收载的合成着色剂有11种，分别为柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、喹啉黄、赤藓红和酸性红，并对其允许使用的食品类型和使用限量做出了明确规定。
《GB 5009.35-2023食品中合成着色剂的测定》于2023年9月6日发布，2024年3月6日实施，试样中的合成着色剂用乙醇氨水溶液提取，经固相萃取净化后,用配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
曼哈格参考《GB 5009.35-2023食品中合成着色剂的测定》，重现了国标饮料中11种合成着色剂的检测方法，采用曼哈格标准物质水中10种色素混标和靛蓝纯品标准物质，BESEP SPE COLUMN P-WAX混合型弱阴离子交换反相固相萃取柱净化样品，C18色谱柱分离，高效液相色谱仪二极管阵列检测器检测，外标法定量。
一、标准物质
混标：水中10种色素混标（苋菜红、胭脂红、柠檬黄、新红、赤藓红、诱惑红、日落黄、亮蓝，喹啉黄、酸性红），1000ug/mL
货号：BePure-30189YW
纯品：靛蓝
货号：BePure-23517靛蓝
二、前处理
萃取柱:弱阴离子交换固相萃取柱BESEP SPE COLUMN P-WAX (WAX) 150mg/6ml
货号：77831-Q
1标准溶液配制
靛蓝标准储备液(1.0 mg/mL)：准确称取按其纯度折算为100%质量的靛蓝100 mg(精确至0.1 mg)，加水溶解并分别置于100 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，得到浓度为1.0 mg/mL的标准储备液，靛蓝不稳定，标准溶液临用现配。
混合标准中间液(50.0μg/mL)：吸取BePure-30189YW(水中10种色素混标，1.0mg/mL) 和靛蓝标准溶液(1. 0 mg/mL) 各5. 00 mL于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液(各合成着色剂 浓度均为50.0μg/mL)，临用现配。
标准系列工作液：吸取混合标准中间液0.2 mL、0.5ml、1.0 mL、2.0mL、5.0 mL 和 10.0 mL于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到标准系列工作液。 浓度分别为0. 2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL和10.0μg/mL。
2提取
准确称取试样2g(精确至0.001 g)，冷冻饮品可先温水浴加热融化再称样，置于50 mL具塞离心管中，加入适量乙醇氨水溶液，涡旋1 min，5000 r/min离心5 min，并用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液；准确吸取上清液10 mL，50℃下氮气浓缩至2 mL，分2 次 ~ 3 次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液 。
3净化
萃取柱：BESEP SPE COLUMN P-WAX(WAX) 150mg/6ml
活化：
依次用 6mL甲醇和6m水活化固相萃取柱,保持柱体湿润。
上样：
活化后立即将待净化液以 2 s~3 s 1滴的流速加载到固相萃取柱上。
淋洗：
依次用6 mL2%甲酸水溶液和6mL甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽2 min至柱体近干。
洗脱：
用6mL2%氨化甲醇溶液洗脱，分两次加入，每次3mL，流速低于 2 s~ 3 s1滴，收集洗脱液。
复溶：
于50 ℃氮气浓缩至近干，准确加入 2 mL pH 为9.0的乙酸铵缓冲溶液溶解，溶液用针筒过滤器，孔径0.45μm的滤膜过滤，弃去2滴 ~ 5滴初滤液，取续滤液作为待测液。
三、仪器检测方法
色谱柱:C18柱,4.6mm×250mm ,5μm
进样量:10μL
柱温:35 ℃
二极管阵列检测器波长范围：400nm~800nm，检测波长：415nm(柠檬黄 、喹啉黄)，520nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红)，610nm(靛蓝、亮蓝)。
流动相：A为20mmol/L乙酸铵溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱如下。
时间/min
流速/(mL/min)
A/%
B/%
0
1.0
90
10
12
1.0
65
40
27
1.0
60
50
29
1.0
50
55
30
1.0
5
95
35
1.0
5
95
35.1
1.0
90
10
42
1.0
90
10
四、检测结果
样品基质
饮料梨汁
本底值
未检出
添加浓度
色素名称
柠檬黄
喹啉黄1
喹啉黄2
喹啉黄3
喹啉黄4
新红
苋菜红
胭脂红
日落黄
诱惑红
酸性红
赤藓红
靛蓝
亮蓝1
亮蓝2
20mg/kg
平均回收率%（n=3）
104
105
105
99
99
105
104
104
104
104
105
97
88
97
98
10mg/kg
平均回收率%（n=3）
97
92
91
96
89
95
98
97
92
95
89
93
94
95
96
5mg/kg
平均回收率%（n=3）
96
90
91
88
92
94
95
94
89
91
84
87
93
93
94
2mg/kg
平均回收率%（n=3）
92
89
90
90
95
93
94
97
90
92
85
98
96
90
91
五、谱图
11种合成着色剂10μg/mL标准曲线点液相色谱图
六、实验注意事项
1、上样时，上样液保证氨水被完全氮吹掉，pH在6左右。
2、洗脱液5%氨水甲醇溶液，不宜使用放置过久的氨水，氨水易挥发，可能会导致5%氨水甲醇浓度不够，色素洗脱不完全。
3、氮吹时氮吹至近干，不可氮吹过干，会导致目标物粉末飞溅，回收率低。
4、溶液用针筒过滤器，孔径0.45μm的滤膜过滤，弃去 2滴 ~ 5滴初滤液，取续滤液作为待测液，滤膜选用亲水的PTFE滤膜。相关产品订购信息
货号
产品描述
规格
BePure-30189YW
标准物质/水中10种色素混标/GB 5009.35-2023 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定
1mL
BePure-30189YW-5mL
标准物质/水中10种色素混标/GB 5009.35-2023 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定
5mL
BePure-23517
标准物质/靛蓝/酸性蓝74
50mg
BePure-23517-10mg
标准物质/靛蓝/酸性蓝74/GB 5009.35-2023
10mg
促BePure-23517-5g
标准物质/靛蓝/酸性蓝74
5g
BePure-23517-250mg
标准物质/靛蓝/酸性蓝74
250mg
77831-Q
实验耗材/混合型弱阴离子交换萃取柱 色素专用柱 SPE COLUMN P-WAX 150mg/6ml/GB5009.35-2023
30pcs/盒
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