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EML4-ALK V3融合突变基因组RNA标准物质

NIM-RM5240

Genomic RNA Reference Material containing EML4-ALK V3 fusion gene

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30μL/管

中国计量院

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EML4-ALK V3融合突变基因组RNA标准物质介绍：

浓度/纯度/标准值：EML4-ALK V3融合突变基因组RNA标准物质的融合基因标准值及扩展不确定度：（1.33±0.19）×10^4 copies/μL（k=2）、（1.37±0.16）×10^4 copies/μL（k=2）和（97.2±8.7）%（k=2）
使用注意事项：实验操作时应在冰上进行解冻，混匀离心后使用，不建议反复冻融。
特征形态：液态
主要分析方法：数字PCR法
定值单位：中国计量科学研究院
规格：30μL/管
定级证书量值信息：

	标准值	相对不确定度(k=2)(%)	单位	备注
突变基因丰度	97.2	9.0	标准值（%）
突变基因浓度	1.33×10⁴	14	标准值（copies/μL）
ALK-ref基因浓度	1.37×10⁴	12	标准值（copies/μL）	包括了ALK非融合基因与EML4-ALK融合基因拷贝数浓度

应用领域：临床\卫生及法医/临床检验
保存条件：置于-80°C冰箱中保存，采用干冰运输。
研制单位名称：中国计量科学研究院

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国家标准：GB/T 34078.1-2017 肿瘤个体化治疗相关基因突变检测试剂盒第1部分：技术条件

适用范围	适用于肿瘤基因突变检测试剂盒的技术要求，包括ALK融合基因检测。
核心检测方法	实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、测序法或荧光原位杂交（FISH）等。
检出限与定量限	检出限≤1%（突变频率），定量限需满足线性范围1%~50%。
质控样品要求	需包含阳性对照、阴性对照及内参基因，样本RNA纯度（A260/A280）应介于1.8~2.1。
关键实验步骤	RNA提取、反转录为cDNA、PCR扩增、荧光信号采集及数据分析。
特别说明	需验证引物特异性，避免非特异性扩增；实验环境需防止气溶胶污染。

行业标准：YY/T 1595-2017 人类EGFR、KRAS、BRAF、ALK等基因突变检测试剂盒

适用范围	针对ALK等基因融合突变的临床检测试剂盒，涵盖RNA水平检测。
核心检测方法	多重PCR联合毛细管电泳或数字PCR，确保高灵敏度。
检出限与定量限	检出限≤0.5%，定量限需覆盖10^2~10^6 copies/μL。
质控样品要求	需包含已知突变浓度的标准物质，且批内重复性CV≤15%。
关键实验步骤	RNA完整性检测（RIN≥7）、逆转录温度优化、扩增循环数控制。
特别说明	需评估RNA降解对结果的影响，建议使用新鲜或-80℃保存样本。

国家标准：实时荧光定量PCR方法通则

适用范围	规范实时荧光定量PCR技术流程，适用于ALK融合基因的定量分析。
核心检测方法	基于TaqMan探针或SYBR Green的定量PCR，标准曲线法或Ct值比较法。
检出限与定量限	最低检测限应通过标准品梯度稀释验证，R²≥0.98。
质控样品要求	需设置无模板对照（NTC）及内参基因（如GAPDH）。
关键实验步骤	反应体系优化（Mg²⁺浓度、引物比例）、扩增效率验证（90%~110%）。
特别说明	避免引物二聚体干扰，建议进行熔解曲线分析。

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