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肺炎克雷伯菌亚种脱氧核糖核酸液体室内质控品

BNCC378802

Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae DNA lab quality control

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冻存管；10^7~10^8copies/mL；10管/盒

北纳生物/BNCC

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肺炎克雷伯菌亚种脱氧核糖核酸液体室内质控品介绍：

产品中文名称：肺炎克雷伯菌亚种脱氧核糖核酸液体室内质控品
产品英文名称：Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae DNA lab quality control
参考用途：本质控品由河南省工业微生物菌种工程技术研究中心研制，为肺炎克雷伯菌亚种灭活悬液，通过添加稳定剂、数字PCR定值后分装而得，可用于方法建立、工作标准赋值、方法确认与评价、产品质量控制等。
形态特性：菌落直径为1-2mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，表面光滑，中间凸起，表面明亮，质地湿润，易挑起，G－（红），杆菌，纯度：纯
培养基：蛋白胨：10.0g，牛肉粉：3.0g，氯化钠：5.0g，琼脂：15.0g，pH值：7.3±0.1(25℃)
培养条件：培养温度37℃；培养时间18-24小时；气体环境好氧；
培养方法：从冰箱取出，完全融化后，涡旋振荡混匀，即可使用。注意：本质控品为灭活颗粒，需提取核酸后使用，提取或纯化试剂需自备，提取前避免反复冻融。
存储形式：-80℃
提供形式：冻存管；10^7~10^8copies/mL；10管/盒
备注：/

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本公司销售的所有产品仅供实验科研使用，不用于人体及临床诊断。

临床微生物学检验核酸测序技术指南

标准名称及标准号

WS/T 683-2020《临床微生物学检验核酸测序技术指南》

适用范围

适用于临床微生物实验室采用核酸测序技术进行病原微生物鉴定及耐药基因检测，包括细菌（含肺炎克雷伯菌）、真菌、病毒等靶向测序和宏基因组测序的质量控制要求。

核心检测方法

1. 靶向测序：针对特定基因（如16S rRNA、gyrB）设计引物进行PCR扩增后测序

2. 全基因组测序：提取微生物全基因组DNA进行文库构建和高通量测序

3. 生物信息学分析：序列比对（BLAST等）、系统发育分析、耐药基因注释

检出限与定量限

• 检出限(LOD)：≥100 CFU/mL（细菌基因组DNA）

• 测序深度：靶向测序≥100×覆盖率，全基因组测序≥50×覆盖率

• 序列质量值：Q30≥80%（即错误率≤0.1%）

质控样品要求

1. 室内质控品：

• 肺炎克雷伯菌DNA质控品需包含明确浓度梯度（10²-10⁵ copies/μL）

• 应包含耐药基因突变（如KPC碳青霉烯酶基因）和野生型对照

2. 稳定性：-70℃保存≥6个月，冻融次数≤3次

3. 定值要求：采用数字PCR进行绝对定量定值

关键实验步骤

DNA提取质控：

• 每批次需同步提取阳性（已知浓度肺炎克雷伯菌）和阴性（无模板）对照

• DNA纯度要求：A260/A280=1.8-2.0，A260/A230≥1.8

PCR扩增：

• 引物特异性验证：需排除交叉反应（如与其他肠杆菌科细菌）

• 扩增体系：含内参（如人GAPDH基因）监控抑制物

特别说明

1. 污染防控：

• 核酸提取区与PCR扩增区物理隔离

• 使用UNG酶防扩增产物污染

2. 结果判读：

• 肺炎克雷伯菌种水平鉴定要求≥97%序列一致性

• 耐药基因需满足≥10×覆盖深度且突变频率≥5%

3. 质控频率：每检测批次需运行阴性/阳性/空白对照

实验室质量控制规范食品分子生物学检测

标准名称及标准号

GB/T 27403-2008《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》

适用范围

适用于所有分子生物学检测实验室（含病原微生物核酸检测）的质量控制体系建立，涵盖人员培训、设备校准、试剂验证、质控品使用等全流程要求。

质控样品要求

1. 质控品分级：

• 一级参比物质（有证标准物质）

• 二级工作标准（实验室内部定量质控品）

2. 验证要求：

• 新批次质控品需与上一批次平行检测≥3次

• 浓度偏差≤±0.5 log值

关键实验步骤

质量控制图：

• 采用Levey-Jennings质控图监控肺炎克雷伯菌DNA质控品CT值

• 警告限：±2SD，失控限：±3SD

设备校准：

• PCR仪：每年进行温度均一性验证（±0.5℃）

• 移液器：季度校准（误差≤±2%）

以上信息仅供参考，请以相应标准的原文为准！