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改良克氏双糖铁琼脂/生化培养基，用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的生化反应筛选

HB6234-1

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250g

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见证书

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改良克氏双糖铁琼脂介绍：

用途：用于细菌复合生化实验(葡萄糖、山梨醇)。

成分(g/L)

酵母粉	3.0
蛋白胨	15.0
牛肉粉	3.0
月示蛋白胨	5.0
氯化钠	5.0
山梨醇	20.0
葡萄糖	1.0
硫酸亚铁	0.2
硫代硫酸钠	0.3
琼脂	13.0
酚红	0.024
pH值7.4 ± 0.2	25℃

检验原理：

蛋白胨、酵母膏、牛肉粉提供氮源、维生素、矿物质；山梨醇、葡萄糖提供可发酵糖类；硫代硫酸钠可被某些细菌还原成H2S，与铁离子生成黑色硫化铁；酚红是pH 指示剂，发酵糖产酸变黄，产碱变红；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

用法：

称取本品 65.52g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装于试管,121℃高压灭菌 15分钟,备用。

注意事项：接种时先在斜面划线，再与底层穿刺。由于培养36~ 48h后小肠结肠炎耶尔森菌会产碱，造成斜面变红，因此应注意培养时效，在培养24h时观察结果。

不同细菌在改良克氏双糖铁琼脂上的生长特征：

改良克氏双糖铁琼脂微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置26±1℃需氧培养24小时。

小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法及结果分析

改良克氏双糖铁培养基原理及现象

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一、适用范围

适用于肠道致病菌（如小肠结肠炎耶尔森氏菌）的生化反应筛选，通过葡萄糖/乳糖发酵及硫化氢产生特性进行微生物鉴别[4][6]。

二、核心检测方法

穿刺接种法：底层穿刺观察细菌动力与葡萄糖发酵，斜面划线观察乳糖发酵。通过酚红指示剂颜色变化（红→黄）及硫化铁黑色沉淀判断结果[4][6]。

三、检出限与定量限

培养基灵敏度需满足：接种大肠埃希氏菌（ATCC 25922）24小时内斜面/底层均变黄且产气；伤寒沙门氏菌（ATCC 14028）斜面保持红色，底层变黄[4][6]。

四、质控样品要求

需使用标准菌株进行培养基性能验证：
1. 阳性对照：大肠埃希氏菌（产酸产气）
2. 阴性对照：普通变形杆菌（仅底层产酸）
3. 硫化氢试验对照：伤寒沙门氏菌（黑色沉淀）[4][6]

五、关键实验步骤

1. 培养基制备：65g干粉溶解于1L蒸馏水，121℃高压灭菌15分钟后分装高层斜面
2. 接种方法：单菌落穿刺至底层后划斜面
3. 培养条件：26℃±1℃培养24小时
4. 结果判读：斜面颜色变化与底层反应需同步记录[4][6]

六、特别说明

1. 培养时间严格控制在18-24小时，过短导致反应不充分，过长可能引起副反应干扰
2. 含硫代硫酸钠成分，操作需在生物安全柜中进行
3. 培养基pH需校正至7.4±0.2，直接影响颜色反应准确性[4][6]

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