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支原体半流体培养基/用于支原体的培养（含葡萄糖；不含精氨酸、酚红）

HB7025-6

Mycoplasma Semi-fluid Medium

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250g

hopebio

见证书

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支原体半流体培养基介绍：

用途：用于支原体的培养（含葡萄糖；不含精氨酸、酚红）。

成分(g/L)

猪胃消化物	10.0
牛肉浸粉	5.0
酵母浸粉	5.0
氯化钠	2.5
葡萄糖	5.0
琼脂	2.5
pH值7.6±0.2	25℃

用法：

称取本品30.0g，加热溶解于800ml纯化水中，121℃高压灭菌15分钟，冷至50℃左右时，无菌操作加入灭活小牛血清或马血清200ml和青霉素80万单位，混匀，分装无菌试管，备用。

支原体半流体培养基(不含精氨酸)微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养7-14天。

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一、适用范围

适用于主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞及临床治疗用细胞的支原体检查，需同时采用培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）进行检测[1][3]。

二、核心检测方法

1. 培养法：供试品接种于支原体液体和半流体培养基中，36℃±1℃培养21天，观察支原体生长情况（如培养基变色）[3]；
2. 指示细胞培养法：将供试品接种于Vero细胞，使用Hoechst 33258染色后通过荧光显微镜观察支原体DNA附着情况[1][3]。

三、检出限与定量限

1. 肺炎支原体（ATCC 15531）检测灵敏度需达10^-8；
2. 口腔支原体（ATCC 23714）检测灵敏度需达10^-4，通过变色单位试验法验证[2][3]。

四、质控样品要求

1. 标准菌种需由国家药品检定机构分发，包括肺炎支原体和口腔支原体；
2. 菌种需经培养基传代培养至变色，盲传两代后用于灵敏度验证[3][5]。

五、关键实验步骤

1. 培养基配制：支原体半流体培养基需添加琼脂2.5~3.0g，灭菌后补加灭能小牛血清（培养基:血清=8:2）及适量青霉素；
2. 接种培养：每支培养基接种0.5~1.0ml供试品，36℃±1℃培养21天，第7天进行次代培养[3][5][7]。

六、特别说明

1. 培养基灵敏度需定期抽检，检测菌株生长特性需符合药典要求；
2. 初次检测疑似阳性时需以加倍供试品量复试，若仍阳性则判定不合格[3][7]。

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