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PNPG试剂/用于克罗诺杆菌的快速鉴定

GB210

4 Nitrophenyl(PNP)α-D-glucopyranoside

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2ml*10支

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PNPG试剂介绍：

中文名：4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷

英文：4 Nitrophenyl(PNP)α-D-glucopyranoside

用途：用于克罗诺杆菌的快速鉴定

标准依据：ISO 22964：2017 食品链微生物学-克罗诺杆菌属基准检验方法

实验方法及作用：

在纯菌的悬液中加入4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷，37℃水浴培养4h后，于405nm处测定吸光度。有研究发现，大约8%的克罗诺杆菌不能在TSA上产黄色色素。而且在TSA上培养需要48h是为了观察黄色素的产生，作为目的菌判断的补充实验，这在一定程度上可能存在漏检的可能，并降低了鉴定的工作效率。

实验准备：

安瓿瓶：从包装盒中取出安瓿瓶，朝易折点（瓶颈上方蓝点）反方向用力折开安瓿瓶：或用砂轮划一圈安瓿瓶瓶颈，然后用力折开安瓿瓶，插入安瓿瓶架中，如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

试管：从包装盒中取出试管，插入试管架中，如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

注：折开安瓿瓶时最好包裹纱布，以免划伤手指。

接种方法：用接种环挑取单个纯化可以菌落至2ml无菌0.85%生理盐水中，制成均一浑浊的菌悬液，将2ml菌悬液加入至PNPG试剂中，37℃水浴培养4h。培养结束后，以加入2ml无菌生理盐水的PNPG试剂管为空白对照，在405nm波长处测OD值。

α-葡萄糖苷酶试验在克罗诺杆菌鉴定中的应用：

PNPG试剂相关产品：

产品货号	产品名称	产品规格	产品说明及用途
HB0177-8	胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）（参比培养基）TSA Agar	250g	一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养
HBPM0177-8	胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板（9cm）（参比培养基）TSA Agar	9cm*10	一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养
HB0177-25K	胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）（25kg）TSA Agar	25kg/桶	一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养，也可用于阪崎肠杆菌的纯化培养和产黄色素试验
HB7012-8	克罗诺杆菌显色培养基Cronobacter Chromogenic Medium	1000ml	用于婴儿配方奶粉和其他食品种克罗诺杆菌的快速检测
HB4084	缓冲蛋白胨水（BPW）Buffered Peptone Water	250g	用于沙门氏菌前增菌培养，亦可用于李斯特氏菌前增菌培养（GB、SN标准）
HB0177	胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）TSA Agar	250g	一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养，也可用于阪崎肠杆菌的纯化培养和产黄色素试验
HB7012	克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）显色培养基Cronobacter (Enterobacter Sakazakii) Chromogenic Medium	1000ml	用于阪崎杆菌的显色培养，阪崎杆菌显蓝色，其它肠杆菌显无色
HB8297-1	脑心浸液肉汤(BHI) BHI Broth	250g	营养丰富，用于培养各种细菌（ISO标准）
HB0102-2	改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）Modified Lauryl Sulfate Tryptose Broth-Vancomycin Medium	250g	用于奶粉中坂崎肠杆菌检验时增菌培养（GB标准）
HB0102-2a	万古霉素溶液Vancomycin Solution	1mg*5支	每支添加于100mlmLST-VM中
HB7012	克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）显色培养基Cronobacter (Enterobacter Sakazakii) Chromogenic Medium	1000ml	用于阪崎杆菌的显色培养，阪崎杆菌显蓝色，其它肠杆菌显无色
HB0176	VRBG琼脂VRBG Agar	250g	用于奶粉中阪崎杆菌的分离培养(FDA、SN方法)
HB0115	西蒙氏枸橼酸盐琼脂Simmons Citrate Medium	250g	用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准)
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HBKP0177	胰蛋白胨大豆琼脂（颗粒）TSA Agar Granule	250g	一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养，也可用于阪崎肠杆菌的纯化培养和产黄色素试验

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ISO 22964:2017 食品链微生物学-克罗诺杆菌属基准检验方法

适用范围

适用于食品及食品生产环境中克罗诺杆菌属的定性检测，特别针对无法通过常规TSA培养基显色鉴定的菌株[3]。

核心检测方法

基于α-葡萄糖苷酶活性检测：纯菌悬液与PNPG试剂反应后，通过分光光度法测定405nm处吸光度变化，判断酶活性存在[3]。

检出限与定量限

该方法为定性检测，未规定具体检出限。阳性判定依据为显色反应与空白对照的显著吸光度差异[3]。

质控样品要求

需同步进行阳性对照（已知产α-葡萄糖苷酶菌株）和阴性对照（无菌生理盐水），确保试剂有效性[3]。

关键实验步骤

1. 菌悬液制备：挑取单菌落制成2ml无菌生理盐水悬液
2. 反应体系：菌悬液与PNPG试剂等体积混合
3. 培养条件：37℃水浴精确控制4小时
4. 检测方法：使用空白管校准后测定405nm吸光度[3]

特别说明

1. 需注意约8%克罗诺杆菌在TSA培养基不产黄色素，需结合本方法补充鉴定
2. 安瓿瓶开封需防污染操作，变色或染菌需废弃
3. 水浴时间偏差超过±10分钟需重新试验[3]

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