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致泻大肠埃希氏菌生化套装/用于致泻大肠埃希氏菌生化鉴定

SHBG14-1

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6种*2套/盒*5盒

hopebio

见证书

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致泻大肠埃希氏菌生化套装介绍：

用于致泻大肠埃希氏菌生化鉴定。

添加剂：

需配套添加 1盒 HB8279 Kovacs 氏靛基质试剂盒

需滴加试剂明细表

使用说明书请点击链接下载：

致泻大肠埃希氏菌生化套装质量控制：按使用说明进行操作，接种后置36±1℃培养。

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食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验

适用范围
本标准适用于食品中致泻大肠埃希氏菌的定性检验，包括预增菌、选择性增菌、分离培养及生化鉴定等步骤。涵盖肉制品、乳制品、蛋制品、蔬菜水果等各类食品基质[6][8]。

核心检测方法
采用三重检测体系：
1. 初筛试验：EC肉汤预增菌（36℃±1℃,18-24h）
2. 选择性增菌：MAC/CT-SMAC平板分离
3. 确认试验：生化反应（三糖铁琼脂、赖氨酸脱羧酶等）结合PCR毒力基因检测[6][8]

检出限与定量限
最低检出限为1CFU/25g(mL)，定量检测需结合MPN计数法。样品稀释梯度建议设置3个连续十倍梯度，每个梯度接种3管EC肉汤[6][8]。

质控样品要求
每批次实验需包含阳性对照（ATCC 25922）和阴性对照（无菌生理盐水）。冷冻样品解冻需在45℃以下水浴15min，干燥样品需无菌称取后加入缓冲蛋白胨水活化[6][8]。

关键实验步骤
1. 样品处理：25g样品+225mL缓冲蛋白胨水均质
2. 选择性增菌：转种EC肉汤44.5℃±0.2℃培养20h
3. 平板分离：MAC琼脂划线培养18-24h
4. 生化确认：三糖铁琼脂反应观察（斜面红/底层黄）[6][8]

特别说明
需区分致泻型与非致泻型大肠埃希氏菌，重点关注eae、stx1/2等毒力基因。冷冻样品需避免反复冻融，含防腐剂样品需适当中和处理。实验环境应满足生物安全二级要求[6][8]。

食品中致泻大肠埃希氏菌检测 MPCR-DHPLC法

适用范围
适用于进出口食品中五种致泻大肠埃希氏菌（ETEC、EPEC、EHEC、EIEC、EAEC）的快速筛查，特别适用于通关时效要求高的口岸检测[2]。

核心检测方法
采用多重PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术，同时检测lt/st、eae、stx1/2、ipaH、aggR等特征基因。PCR扩增与DHPLC分析需在独立分区完成[2]。

检出限与定量限
方法灵敏度达10² CFU/mL，定量检测需配套实时荧光定量PCR仪。标准曲线需用已知浓度的DNA梯度制作[2]。

质控样品要求
每批检测应包含阳性对照（含所有靶标基因的混合DNA）和阴性对照（无菌水）。DNA提取需使用经验证的试剂盒，OD260/280比值需在1.8-2.0之间[2]。

关键实验步骤
1. 核酸提取：煮沸法或柱式法提取细菌DNA
2. 多重PCR：94℃预变性5min，35循环扩增
3. DHPLC分析：50℃洗脱温度，0.9mL/min流速
4. 峰型判定：与标准菌株色谱峰保留时间比对[2]

特别说明
需注意引物二聚体干扰，建议每次运行前进行柱效验证。DHPLC设备需每周用75%乙腈冲洗维护，防止色谱柱污染。阳性结果需经传统培养法确证[2]。

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