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卵黄琼脂培养基基础/用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准）

HB0262

Egg Yolk Agar Base

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250g

hopebio

见证书

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卵黄琼脂培养基基础介绍：

用途：用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准）。

添加剂：每瓶需配套添加 10盒 HB8295 50%卵黄乳液使用，每支添加于50ml卵黄琼脂培养基基础。

成分(g/L)

检验原理： 蛋白胨和牛肉粉提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；产气荚膜梭菌具有卵磷脂酶分解卵磷脂生成不溶性甘油酯形成乳白色的混浊带。

用法：

称取本品48.0g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷至50℃左右时，加入50%卵黄乳液100ml，摇匀，倾入无菌平皿。

不同细菌在卵黄琼脂培养基基础上的生长特征：

金黄色葡萄球菌

乳白色菌落，无浑浊带

产气荚膜梭菌

乳白至淡黄色菌落，有较大浑浊带

卵黄琼脂培养基基础微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃厌氧培养18-24小时。注：回收率计算时，用TSC琼脂做对照培养基。

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标准名称及标准号

GB 4789.13-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验》

适用范围

本标准适用于食品中产气荚膜梭菌的分离与鉴定，包括肉制品、乳制品、水产品等。通过卵黄琼脂培养基检测卵磷脂酶活性，结合菌落形态和生化反应进行确认。

核心检测方法

1. 样品预处理后接种至卵黄琼脂培养基，观察乳白色沉淀环（卵磷脂酶阳性反应）。
2. 通过选择性培养基（如TSC培养基）抑制杂菌，分离单菌落。
3. 结合动力试验、硝酸盐还原试验等生化反应进行鉴定。

检出限与定量限

检出限：1 CFU/g(mL)（通过选择性增菌后检测）。
定量限：10 CFU/g(mL)（直接平板计数法）。

质控样品要求

1. 阳性对照：使用产气荚膜梭菌标准菌株（如ATCC 13124），在卵黄琼脂上应形成典型沉淀环。
2. 阴性对照：使用不产卵磷脂酶的梭菌或其他非目标菌，确保培养基选择性。
3. 每批次实验需包含平行样品，偏差不得超过±1个对数值。

关键实验步骤

1. 样品均质与稀释：按1:10比例稀释样品，避免高温破坏菌体。
2. 选择性增菌：在45℃水浴中快速混合样品与TSC培养基，厌氧培养18-24小时。
3. 卵黄琼脂分离：取增菌液划线接种，厌氧培养24小时后观察菌落形态及沉淀环。
4. 生化确认：对疑似菌落进行革兰染色、动力试验及乳糖发酵试验。

特别说明

1. 卵黄琼脂需现配现用，避免卵黄成分氧化影响沉淀环观察。
2. 厌氧培养条件要求严格，需使用厌氧罐或厌氧袋并配合指示剂验证。
3. 若检测肉毒梭菌，需额外增加神经毒素检测步骤（如小鼠生物试验），本标准不涵盖相关内容。

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