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绿脓菌素测定培养基（PDP）/用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验

HB5187

Pseudomonas Agar Medium for Detection of Pyocyanin

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250g

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绿脓菌素测定培养基（PDP）介绍：

用途：用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验。

成分(g/L)

蛋白胨	20.0
氯化镁	1.4
硫酸钾	10.0
琼脂	18.0
pH值7.4 ± 0.1	25℃

检验原理：

蛋白胨和甘油提供碳氮源；氯化镁和硫酸钾促进绿脓色素和荧光素的产生；琼脂是培养基的凝固剂。

用法：

称取本品49.4g，另称取10g甘油，加热煮沸完全溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。

注：甘油需用户自备。

注：培养基中含少量氯化镁，灭菌后可能出现微量沉淀。

绿脓菌素生成试验方法及原理：

方法：挑取可疑菌落接种在在绿脓菌素测定用培养基（PDP）斜面上，培养24小时，观察斜面有无色素。如有色素，在试管内加氯仿3.0～5.0mL，充分震摇，使培养物中的绿脓菌素提取在氯仿中，待氯仿提取液呈现绿色时，加1mol/L盐酸约1mL，震摇后静置片刻，上层盐酸溶液中呈现粉红至红色实验结果为阳性，否则为阴性。

原理：铜绿假单胞菌能产生的绿脓菌素能被氯仿提取，且在水中溶解度比氯仿大，并且会发生可逆的氧化还原反应，氧化时碱性呈蓝色，酸性呈红色。所以加入盐酸溶液并震摇后，绿脓菌素会由氯仿转移至盐酸溶液中，并在酸性环境中呈红色。

绿脓菌素测定用培养基（PDP）中细菌的生长情况：

绿脓菌素测定培养基（PDP）微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养24±2小时。

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一、适用范围

绿脓菌素测定培养基（PDP）主要用于绿脓杆菌（铜绿假单胞菌）的绿脓菌素定性检测，适用于药品、食品、环境样本等微生物检测领域，需遵循GB标准中关于铜绿假单胞菌检测的规范要求[6]。

二、核心检测方法

1. 增菌培养：样品液经增菌培养基（如mEC肉汤）37℃培养18-24小时。
2. 分离培养：划线接种于PDP琼脂斜面，37℃培养24小时。
3. 绿脓菌素提取：加入三氯甲烷萃取色素，与盐酸反应显色判定结果[8][9]。

三、检出限与定量限

该方法为定性检测，未明确定量限。检出限取决于样品预处理及目标菌浓度，通常需满足GB标准中铜绿假单胞菌的检测灵敏度要求[6][8]。

四、质控样品要求

1. 阳性对照：铜绿假单胞菌标准菌株（如ATCC 9027），应生长良好且绿脓菌素试验阳性。
2. 阴性对照：未接种的PDP培养基，试验结果应无色素反应[6][8]。

五、关键实验步骤

1. 培养基配制：称取46.4g干粉溶于1L水，加10g甘油，灭菌后制成斜面。
2. 样品处理：按标准增菌后划线接种。
3. 显色判定：三氯甲烷萃取液加盐酸呈粉红色为阳性[6][8][9]。

六、特别说明

1. 存储条件：干粉需避光干燥保存，保质期3年。
2. 操作防护：称量时需佩戴口罩防粉尘。
3. 结果验证：氧化酶试验阳性且革兰阴性无芽孢杆菌需结合绿脓菌素试验综合判定[6][8][9]。

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