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MRS琼脂/用于食品中乳酸菌的分离培养或计数

HB0384

MRS Agar

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250g

hopebio

见证书

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MRS琼脂介绍：

用途：用于食品中乳酸菌的分离培养或计数。

成分(g/L)

蛋白胨	10.0
牛肉浸粉	8.0
酵母浸粉	4.0
葡萄糖	20.0
磷酸氢二钾	2.0
柠檬酸氢二铵	2.0
乙酸钠	5.0
硫酸镁	0.2
硫酸锰	0.04
琼脂	14.0
吐温80	1.0
pH值6.5±0.2	25℃

检验原理：

蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80 和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌并中和细胞毒性物质，为乳酸菌提供一个良好的生长环境；琼脂是培养基的凝固剂。

用法：

称取本品66.2g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，备用。

注：培养基中有少量的硫酸镁和硫酸锰，灭菌后可能出现微量沉淀。

MRS上德氏乳杆菌和嗜热链球菌的菌落形态：

MRS上德氏乳杆菌和嗜热链球菌的菌落形态

乳酸菌保存方法

方法1：

菌株可保存于甘油肉汤保存管内，取纯化后的菌落接种于MRS平板培养基内，于35±1℃厌氧培养48-72h，用无菌棉签刮取适量菌落于甘油肉汤管内混匀，于-80℃冰箱保存。

方法2：

长期保存可将菌株冷冻干燥后冷藏保存，取纯化后的菌落接种于MRS平板培养基内，于35±1℃厌氧培养48-72h后，向每个平板中加入1mL脱脂奶粉配成的冻存液，用L涂布棒刮取平板上菌落于冻存液内，继而吸取200uL放入冻干瓶内，冻干后于2-4℃冰箱保存。

MRS琼脂微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养48±2小时。

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国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》解读

标准名称及标准号

GB 4789.35-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》

适用范围	适用于食品中乳酸菌的分离、培养、计数及鉴定，包括乳制品、发酵食品及其他可能含活性乳酸菌的样品。

核心检测方法

采用选择性培养基（如MRS琼脂）进行倾注或涂布分离，通过需氧/厌氧培养（36±1℃,48±2小时）后计数典型菌落，结合菌落形态及生化试验确认乳酸菌。

检出限与定量限

检出限为10 CFU/g(mL)，定量限为1 CFU/g(mL)，需通过梯度稀释法确保计数结果在30-300 CFU的可靠范围内。

质控样品要求

1. 阳性对照：使用标准菌株（如嗜热链球菌ATCC 19258）验证培养基性能；
2. 阴性对照：使用大肠埃希氏菌验证培养基选择性；
3. 平行样品：每批次至少检测2个平行样，结果偏差应≤15%。

关键实验步骤

1. 样品预处理：无菌均质后梯度稀释（10^-1-10^-7）；
2. 涂布培养：取适宜稀释度样品液0.1-1mL涂布MRS琼脂平板；
3. 厌氧培养：36℃下使用厌氧罐或厌氧袋培养48小时；
4. 结果计算：选择30-300 CFU的平板按公式计算单位样品乳酸菌数。

特别说明	1. MRS琼脂需进行预验收试验，确保典型菌落恢复率≥70%； 2. 部分乳酸菌（如双歧杆菌）需改良MRS培养基（添加半胱氨酸）或延长培养时间； 3. 活菌计数需在采样后4小时内完成前处理。

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