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MRS琼脂/用于食品中乳酸菌的分离培养或计数

HB0384

MRS Agar

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250g

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见证书

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MRS琼脂介绍：

用途：用于食品中乳酸菌的分离培养或计数。

成分(g/L)

蛋白胨	10.0
牛肉浸粉	8.0
酵母浸粉	4.0
葡萄糖	20.0
磷酸氢二钾	2.0
柠檬酸氢二铵	2.0
乙酸钠	5.0
硫酸镁	0.2
硫酸锰	0.04
琼脂	14.0
吐温80	1.0
pH值6.5±0.2	25℃

检验原理：

蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、吐温-80 和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌并中和细胞毒性物质，为乳酸菌提供一个良好的生长环境；琼脂是培养基的凝固剂。

用法：

称取本品66.2g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，备用。

注：培养基中有少量的硫酸镁和硫酸锰，灭菌后可能出现微量沉淀。

MRS上德氏乳杆菌和嗜热链球菌的菌落形态：

MRS上德氏乳杆菌和嗜热链球菌的菌落形态

乳酸菌保存方法

方法1：

菌株可保存于甘油肉汤保存管内，取纯化后的菌落接种于MRS平板培养基内，于35±1℃厌氧培养48-72h，用无菌棉签刮取适量菌落于甘油肉汤管内混匀，于-80℃冰箱保存。

方法2：

长期保存可将菌株冷冻干燥后冷藏保存，取纯化后的菌落接种于MRS平板培养基内，于35±1℃厌氧培养48-72h后，向每个平板中加入1mL脱脂奶粉配成的冻存液，用L涂布棒刮取平板上菌落于冻存液内，继而吸取200uL放入冻干瓶内，冻干后于2-4℃冰箱保存。

MRS琼脂微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养48±2小时。

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食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验

适用范围
本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验，包括乳杆菌属、双歧杆菌属及嗜热链球菌的分离、培养与计数[4]。

核心检测方法
采用MRS琼脂培养基进行乳酸菌的分离与计数，需在36℃±1℃条件下进行厌氧或兼性厌氧培养。新增实时荧光PCR法作为选做方法，用于快速鉴定特定菌种[4][7]。

检出限与定量限
常规培养法检出限为10 CFU/g（mL），定量限为100 CFU/g（mL）；实时荧光PCR法灵敏度可达1×10² CFU/g（mL）[4]。

质控样品要求
需使用标准菌株（如植物乳杆菌ATCC 8014）进行培养基性能验证。样品稀释液需预热至36℃±1℃，均质过程需使用拍击式均质器规范操作[4][7]。

关键实验步骤
1. 样品预处理：含包埋技术处理的样品需特殊前处理
2. 培养基配制：MRS琼脂需添加莫匹罗星锂盐（双歧杆菌鉴定）或半胱氨酸盐酸盐（乳杆菌属）
3. 培养条件：严格控温36℃±1℃，厌氧环境培养48±2小时[4][7]

特别说明
1. 新版标准强化生化鉴定要求：明确乳酸菌需满足触酶阴性、硝酸还原酶阴性等7项生化特性
2. 培养基成分调整：葡萄糖含量从2%提升至2.5%，增强乳酸菌生长能力
3. 质控升级：新增DNA提取液验证步骤，确保PCR检测准确性[7]

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