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结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂(VRBA-MUG)/用于大肠杆菌酶底物法平板计数

HB0114-7

VRBA-MUG

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结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂(VRBA-MUG)介绍：

用途：用于大肠杆菌酶底物法平板计数。

成分（g/L）

蛋白胨	7.0
酵母膏	3.0
氯化钠	5.0
乳糖	10.0
胆盐	1.5
结晶紫	0.002
中性红	0.03
琼脂	15.0
MUG	0.1
pH值7.4±0.1	25℃

检验原理:

蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素；乳糖是可发酵的糖类；氯化钠可维持均衡的渗透压；3 号胆盐抑制革兰氏阳性菌，特别抑制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；结晶紫对革兰氏阳性菌如葡萄球菌、白喉杆菌，以及绿脓杆菌、白念珠菌、表皮癣菌有杀灭作用，对其他革兰氏阴性菌和抗酸菌几乎无作用；中性红为pH 指示剂；琼脂为凝固剂；大肠埃希氏杆菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用于4-甲基伞形酮-β-D 葡萄糖醛酸苷（4-Methylumbellifery-β-D-Glucuronide 简称MUG）的β糖醛酸苷键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm 紫外灯下产生蓝白色荧光。97%的大肠埃希氏杆菌、10%的沙门氏菌以及少量的志贺氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶。

以下来自平板计数法修订摘要：

VRBA-MUG平板计数法的原理是，超过96%的大肠埃希氏菌菌株（包括不产气菌株）都能产生β-葡萄糖苷酸酶，MUG被该酶分解后游离出4-甲基伞形酮，在366nm紫外光下,游离的4-甲基伞形酮发出带蓝色的荧光，而与β-葡萄糖苷结合状态的4-甲基伞形酮不显荧光，观察到带蓝色荧光即认为是大肠埃希氏菌阳性。肠杆菌科中β-葡萄糖苷酸酶阳性的细菌除了大肠埃希氏菌之外，还有某些志贺氏菌、沙门氏菌和耶尔森氏菌，但考虑到这些菌都是致病菌，所以这种假阳性在公共卫生学上不认为是缺陷。而且，经Moberg对1400多份样品进行检验,未发现1次这种假阳性，说明这种假阳性的发生极为少见。

用法：

称取本品41.6g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸2分钟。冷至45-50℃时,备用。无需高压灭菌。

结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂微生物质控结果：

结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂的微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。

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产品货号	产品名称	产品规格	产品说明及用途
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HB8536-1	艾格LT100肉汤	250g	用于化妆品中好氧菌的增菌培养
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HB0158	去氧胆酸盐枸橼酸盐乳糖蔗糖琼脂DCLS Agar	250g	用于沙门氏菌和志贺氏菌的分离培养
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HB0108-3	营养肉汤（GB/T20944.1-2007纺织品标准）Nutrient Agar	250g	一般细菌培养，转种，复壮，增菌等，也可用于消毒效果检测
HBPT8621-1	磷酸盐缓冲液管（PBS pH7.2）（9ml）	9ml*20支/盒	用于菌落总数，大肠菌群，金葡菌，大肠杆菌样品制备
HB8720	ModifiedSclohtens’Broth(MSB)Modified Sclohtens’ Broth	250g	用于阴沟肠杆菌的培养
HB8722	葡萄糖肉汤Dextrose Broth	250g	用于营养苛求菌培养和肠道菌产气实验
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HB8720	ModifiedSclohtens’Broth(MSB)Modified Sclohtens’ Broth	250g	用于阴沟肠杆菌的培养
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HB8772	菌种和底层琼脂培养基Medium I(foe Seed and Basal Layer)	250g	用于抗生素效价测定的底层培养基或菌种活化
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HB8528	营养肉汁琼脂Nutrient Agar	250g	用于一般细菌复苏和纯化培养
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HB6238-4	麦康凯琼脂（不含氯化钠和结晶紫）MacConkey Agar	250g	用于革兰氏阴性菌的分离培养（抑制变形杆菌的漫延）
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HB0110-4	乳糖胆盐培养液Lactose Bile Broth	250g	用于医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群检测
HBBD0114-200	结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) 袋装即用型(200ml)Violet Red Bile Agar	200ml/袋*10	用于大肠菌群的固体平板检测(GB、SN标准)
HBPT0111	乳糖复发酵管（10ml）Lactose Broth Tube	10ml*20支	用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)

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GB 4789.28—2013 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

适用范围	本标准适用于食品微生物学检验中培养基和试剂的质量控制，特别是针对大肠菌群的检测。VRBA-MUG琼脂专用于原料乳、乳制品及食品中大肠菌群的分离与计数，通过酶底物反应（MUG）实现特异性检测[3]。

核心检测方法

采用生长率、选择性及特异性实验评估培养基性能。VRBA-MUG通过胆盐抑制非目标菌，乳糖发酵菌落呈紫色，结合β-D-葡萄糖苷酶分解MUG产生荧光反应，特异性检测大肠杆菌[3]。

检出限与定量限

检出限为1 CFU/g（或mL），定量限为10–100 CFU/g（或mL）。需通过标准菌株验证（如大肠杆菌ATCC 25922），确保菌落形态及荧光反应符合要求[3]。

质控样品要求

质控菌株包括大肠杆菌ATCC 25922（阳性对照）和弗氏柠檬酸杆菌ATCC 43864（选择性验证）。推荐补充菌株CMCC 48098及CICC 22910用于培养基验收[3]。

关键实验步骤

1. 培养基制备：按比例称量干粉，灭菌后调节pH至7.4±0.1；
2. 样品稀释与接种：梯度稀释后倾注法接种；
3. 培养条件：36±1℃孵育18-24小时，观察菌落及荧光反应[3]。

特别说明	1. VRBA-MUG不可替代传统VRBA用于非大肠杆菌检测； 2. 荧光反应需在366 nm紫外灯下观察，避免长时间暴露； 3. 培养基保存条件为2–8℃，避免反复冻融[3]。

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