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亚硫酸铁多粘菌素B琼脂/用于亚硫酸还原梭状芽孢杆菌的计数

HB0304-2

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250g

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见证书

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亚硫酸铁多粘菌素B琼脂介绍：

用途:用于亚硫酸还原梭状芽孢杆菌的计数

添加剂：每瓶需配套添加 6盒 HB0304-2a 多粘菌素B(4ug) 和 6盒 HB0304-2b 硫酸新霉素（100ug）使用，每200ml亚硫酸铁多粘菌素B琼脂添加1支HB0304-2a和1支HB0303-2b。

成分(g/L)：

胰蛋白胨	15.0
酵母浸粉	10.0
亚硫酸钠	1.0
柠檬酸铁铵	0.5
琼脂	16.0
pH值 7.6± 0.1	25℃

检验原理胰蛋白胨和酵母浸粉用于提供氮源，柠檬酸铁铵和亚硫酸钠提供还原性并产生硫化氢使菌落呈黑色，多粘菌素B 和硫酸新霉素可以抑制非还原性梭状芽孢杆菌的生长，琼脂为凝固剂。

用法

称取本品 42.5g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,每瓶 200ml,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至 45-50℃时,无菌加入一支多粘菌素 B(4μg)和 1 支硫酸新霉素(100μg),混匀,倾入无菌平皿,备用。

亚硫酸铁多粘菌素B琼脂的微生物质控结果

亚硫酸铁多粘菌素B琼脂微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置37±1℃厌氧培养24-48小时。注：回收率计算时，用TSC琼脂做对照培养基。

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ISO 15213:2003 食品和动物饲料微生物学-厌氧亚硫酸盐还原菌的计数水平法

适用范围	适用于食品、肉制品及动物饲料中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌（如产气荚膜梭菌）的定量检测，特别针对需选择性抑制杂菌的样本[1][7]。

核心检测方法

采用亚硫酸铁多粘菌素B琼脂作为选择性培养基，通过胰蛋白胨和酵母浸粉提供氮源，亚硫酸钠与柠檬酸铁铵反应生成黑色硫化铁沉淀作为指示系统，多粘菌素B抑制革兰氏阴性杂菌[1][7]。

检出限与定量限

最低检出限为10 CFU/g，定量范围为10-100 CFU/平板，回收率要求≥70%（以产气荚膜梭菌ATCC 13124为质控菌株）[1][7]。

质控样品要求

需使用ATCC 13124标准菌株作为阳性对照，接种量控制在10-100 CFU/平板，同时需设置空白培养基对照以验证无菌性[1][7]。

关键实验步骤

1. 培养基制备：42.5g基础培养基溶于1L蒸馏水，121℃灭菌15分钟后冷却至45-50℃，无菌添加多粘菌素B(4μg)和硫酸新霉素(100μg)
2. 样品稀释与接种：采用10倍梯度稀释法，选择2-3个适宜稀释度倾注平板
3. 培养条件：37℃±1℃厌氧环境中培养24-48小时，观察黑色菌落形成[1][3][7]

特别说明	1. 培养基需现配现用，添加抗生素后应在1周内使用完毕 2. 培养过程需严格厌氧，建议使用厌氧罐配合厌氧产气袋 3. 黑色菌落需经镜检确认芽孢形态，排除假阳性[1][3][7]

SN/T 0169-2010 进出口食品中产气荚膜梭菌检验方法

适用范围	适用于进出口肉类、水产品及即食食品中产气荚膜梭菌的法定检验，特别适用于通关卫生检疫[7]。

核心检测方法

在ISO方法基础上增加动力-硝酸盐培养基鉴定步骤，要求菌株在亚硫酸铁琼脂上呈黑色菌落且硝酸盐还原试验阳性[7]。

质控样品要求

除ATCC 13124外，需额外使用ATCC 3624标准菌株验证培养基选择性，非目标菌（如艰难梭菌）应无生长[7]。

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