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R2A琼脂即用型袋装（200ml）/用于纯化水中菌落总数的测定

HBBD0167-5-200

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200ml/袋*10

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R2A琼脂即用型袋装（200ml）介绍：

用途：用于纯化水中菌落总数的测定，（EP、USP、Chp标准）

成分（g/L）：

酵母浸出粉	0.5
蛋白胨	0.5
酪蛋白水解物	0.5
葡萄糖	0.5
可溶性淀粉	0.5
磷酸氢二钾	0.3
无水硫酸镁	0.024
丙酮酸钠	0.3
琼脂	15.0
pH值7.2±0.2	25℃

检验原理：

酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖、为可发酵糖类；可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质；丙酮酸钠可增强细菌的复苏。磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；无水硫酸镁提供二价阳离子；琼脂为凝固剂。

用法：

将本品完整包装放置于100℃沸水中水浴20min~30min,待培养基完全溶解后冷却至45℃~50℃时,摇匀,备用。

储存条件及有效期

1.2-25℃保存。

2.本产品在储存条件下有效期为六个月。

使用方法

将本品完整包装放置于100℃沸水浴中加热20-30min，待培养基至培养基完全溶解后冷却至45℃~50℃时，撕开外层包装，在无菌环境中拧开盖子，将培养基倾入无菌平皿中，凝固后备用。

注意事项

1.若出现污染、破损、变色、泄露等现象时，则不能使用。

2.水浴加热过程中无需打开外层包装，产品内部有少量气体受热后出现膨胀为正常现象。

3.使用后的培养基应进行消毒处理。

4.本产品使用方法非强制性，如用户有具体参考资料可进行相应调整。

不同药典关于纯化水的微生物检测方法和质量标准

中国药典

【检查】微生物限度取本品不少于 1ml，按薄膜过滤法处理后，采用 R2A 琼脂培养基，30～35℃培养不少于 5 天，依法检查（通则 1105），每1ml 供试品中需氧菌总数不得过 100cfu。

操作简述：

除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节 pH 值使加热后在 25℃的 pH值为 7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 R2A 琼脂培养基适用性检查试验照通则 1105 中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。应符合规定。

USP标准

在美国药典中，推荐使用0.45μm薄膜过滤法，并同时使用高营养培养基（平板计数琼脂培养基（PCA））于30-35℃培养72小时以上，和低营养培养基（R2A琼脂）于20-25℃培养96小时以上。检测标准为：≤100cfu/ml 。

操作简述：（可根据实际情况调整）

量取10ml充分混匀的水样，以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用 pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml,共冲洗1次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于琼脂平板上。共制备 2张滤膜，一张滤膜贴于平板计数琼脂培养基平板（高营养培养基）置30℃~35℃生化培养箱中倒置培养2~3天，计数。另一张滤膜贴于R2A琼脂平板（低营养培奍基），置20℃~25℃生化培养箱倒置培养5~7天，计数。以培养基平板上菌落数生长较多者作为检测结果，按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。EP标准

在欧洲药典中使用薄膜过滤法（0.45μm 孔径滤膜），使用 R2A 琼脂培养基在 30℃～35℃培养 5 天以上。质量标准：≤100cfu/mL。

操作简述：（可根据实际情况训整）

量取 10ml 充分混匀的水样，以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用 pH7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为 100ml，共冲洗 1 次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于 R2A 琼脂平板上, 置 30℃～35℃生化培养箱中倒置培养 5 天，计数。按比例折算为 1ml 纯化水中的微生物数量后报告。

R2A琼脂即用型袋装（200ml）微生物灵敏度试验： 按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置30-35℃需氧培养18-120小时。

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一、适用标准及解读

标准名称	《中国药典》2015年版四部通则1105
关联性	R2A琼脂培养基适用性检查的核心依据标准[2][5]

二、适用范围

用于需氧菌计数测定及纯化水的微生物限度检查，验证不同批号培养基的适用性一致性[2][5]

三、核心检测方法

采用对照培养基对比法，通过铜绿假单胞菌（ATCC 9027）和枯草芽孢杆菌（ATCC 6633）的菌落数量、形态及生长状态进行评价[2][5]

四、质控样品要求

1. 阳性对照：使用标准菌株接种对照培养基
2. 阴性对照：未接种培养基无菌性验证
3. 菌种传代不超过5代[2][5]

五、关键实验步骤

1. 培养基配制：称取米黄色粉末，高压灭菌后呈白色半透明固体
2. 菌液制备：菌悬液浓度控制在50-100 CFU
3. 培养条件：倒置培养于30-35℃需氧环境，时间不少于72小时[2][5][10]

六、特别说明

1. pH值范围7.0-7.4，含丙酮酸钠增强受损菌复苏能力
2. 可溶性淀粉吸附有害代谢产物
3. 灵敏度需达到对照培养基菌落回收率≥70%[2][5][10]

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