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酪蛋白琼脂/用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验

HB0252

Casein Agar

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250g

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酪蛋白琼脂介绍：

用途：用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验。

成分(g/L)

酪蛋白	10.0
牛肉浸粉	3.0
氯化钠	5.0
磷酸氢二钠	2.0
琼脂	15.0
溴麝香草酚蓝	0.05
pH值7.4±0.1	25℃

检验原理：某些细菌产生酪蛋白酶可分解酪蛋白使菌落周围的培养基形成透明圈；牛肉浸粉提供氮源、维生素和生长因子；磷酸氢二钠为缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；溴麝香草酚蓝为指示剂染料。

用法：

称取本品35.0g，加热溶解于1000ml 蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌 20 分钟，备用。

注：培养基中的酪蛋白不溶，呈浑浊状，摇匀到平板即可。

不同细菌在酪蛋白琼脂平板上的生长特征：

酪蛋白琼脂微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置30±1℃需氧培养24小时。

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食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验

适用范围

本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌的检验方法，适用于食品及食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的定性检测和定量分析。该标准特别强调对食品生产、加工及流通环节的微生物污染监控[3][4]。

核心检测方法

1. 菌落计数法：采用选择性培养基（如MYP琼脂）分离目标菌并进行计数；
2. 生化鉴定：通过溶血试验、硝酸盐还原试验、VP试验等生化反应确认菌种；
3. 分子生物学辅助鉴定（如PCR）用于复杂样本的精确鉴别[3][4]。

检出限与定量限

1. 定性检测：样本中蜡样芽胞杆菌的最低检出限为1 CFU/25g；
2. 定量检测：平板计数法的定量限为10 CFU/g，采用MPN法则定量限为3 CFU/g[3]。

质控样品要求

1. 需使用标准菌株（如ATCC 11778）进行培养基性能验证；
2. 每批次检测应包含阳性对照（蜡样芽胞杆菌）和阴性对照（枯草芽胞杆菌）；
3. 质控频率：每20个样品至少设置1组质控对照[3][4]。

关键实验步骤

1. 样品预处理：无菌称取25g样品与225mL稀释液均质；
2. 选择性增菌：30℃培养24h后进行热处理（80℃水浴10min）；
3. 平板分离：接种MYP琼脂平板，30℃培养24-48h观察典型菌落；
4. 确证实验：对可疑菌落进行革兰染色、运动性观察及生化试验[3][4]。

特别说明

1. 需注意蜡样芽胞杆菌与苏云金芽胞杆菌的鉴别，后者在MYP平板上同样呈现典型形态；
2. 对于热处理后的样品，应严格控制水浴温度和时间以保证芽胞复苏；
3. 该标准替代GB/T 4789.14-2003，新增分子生物学检测方法作为仲裁依据[3][4]。

[3] GB4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验 [4] GB 4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验

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