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硝酸盐肉汤/用于蜡样芽孢杆菌硝酸盐还原试验

HB0277

Nitrate Broth

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250g

hopebio

见证书

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硝酸盐肉汤介绍：

用途：用于蜡样芽孢杆菌硝酸盐还原试验。

添加剂：每盒需配套添加1盒HB8282 硝酸盐还原试剂使用。

成分（g/L）

牛肉浸粉	3.0
蛋白胨	5.0
硝酸钾	1.0
pH值7.0±0.1	25℃

硝酸盐还原试验原理：

蛋白胨和牛肉浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；某些细菌可利用硝酸盐产亚硝酸盐、氨或氮气。滴加硝酸盐还原试剂后若试验菌培养物中有亚硝酸盐，可与乙酸、对苯氨基苯磺酸和α-萘胺反应生成红色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若试验菌可利用硝酸盐产亚硝酸盐进一步转化为氮气，则小倒管中会有气体囤积，判定为阳性。若试验菌可将亚硝酸盐转化为氨，则滴加硝酸盐还原试剂呈无色反应，此时需加入适量锌粉证明培养物中是否有未被利用的硝酸盐存在，若加入锌粉后为无色则证明无硝酸盐，则可判断为阳性。试验菌不利用硝酸盐，滴加硝酸盐还原试剂后为无色，加入锌粉后变为红色，证明培养物中有未被利用的硝酸盐被锌粉还原为亚硝酸盐产生红色反应，此时判断为阴性。

用法：

称取本品9.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装试管，每管5ml，121℃高压灭菌15分钟，备用，

硝酸盐肉汤微生物质控结果：

在硝酸盐肉汤中，福氏志贺氏菌、大肠埃希氏菌、蜡样芽胞杆菌生长，溶液变红色，

单增李斯特氏菌生长，溶液不变红色，仍为黄色。

硝酸盐肉汤微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置35±1℃需氧培养24±2小时。

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ISO 3091:1975 标准解读

适用范围	本标准适用于肉及肉制品中硝酸盐含量的测定，特别针对加工肉制品的质量控制[1]。

核心检测方法

采用分光光度法：
1. 热水提取样品中的硝酸盐
2. 蛋白质沉淀后过滤处理
3. 镉柱还原硝酸盐为亚硝酸盐
4. 磺胺与盐酸萘乙二胺显色反应
5. 538 nm波长处测定吸光度[1]

检出限与定量限

未明确限定具体数值，但方法灵敏度取决于分光光度计精度，建议校准仪器至0.1 mg/kg量级检测能力[1]。

质控样品要求

1. 样品需均质化处理至粒径≤2 mm
2. 提取过程需控制水温在80±5℃
3. 蛋白质沉淀需完全，滤液澄清透明
4. 镉柱还原效率需≥95%[1]

关键实验步骤

1. 样品称量精度需达0.001 g
2. 显色反应时间控制在15±1分钟
3. 标准曲线需覆盖0-50 mg/kg浓度范围
4. 每批次检测需包含空白对照和加标回收实验[1]

特别说明	1. 本方法为国际仲裁方法 2. 显色试剂需现用现配 3. 镉柱使用前后需用稀盐酸活化 4. 适用于硝酸盐含量≥10 mg/kg的样品[1]

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