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0.5%碱性复红溶液/作为蜡样芽孢杆菌蛋白质毒素结晶试验用的染色液使用

HB8769

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5ml*4

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见证书

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0.5%碱性复红溶液介绍：

用途：作为蜡样芽孢杆菌蛋白质毒素结晶试验用的染色液使用。

试剂盒组成：

组成	规格	配制依据
0.5%碱性复红溶液	5ml*4	取碱性复红0.5g碱性复红，溶解于20mL乙醇中，再用蒸馏水稀释至100ml。

蛋白质毒素结晶试验：

挑取纯培养的单个可疑菌落接种于硫酸锰营养琼脂平板上，30℃±1℃培养24h±2h，并于室温放置3d ～4d ，挑取培养物少许于载玻片上，滴加蒸馏水混匀并涂成薄膜。经自然干燥，微火固定后加甲醇作用30s后倾去，再通过火焰干燥，于载玻片上滴满0.5%碱性复红，放火焰上加热（微见蒸气，勿使染液沸腾)持续1min～2min，移去火焰，再更换染色液再次加温30s，倾去染液用洁净自来水彻底清、晾干后镜检。观察有无游离芽胞（浅红色）和染成深红色的菱形蛋白结晶体。如发现游离芽孢形成的不丰富，应再将培养物置室温2d-3d后进行检查。除苏云金芽孢杆菌外，其他芽孢杆菌不产生蛋白结晶体。

不同细菌在0.5%碱性复红溶下的生长特征：

①深红色菱形或方形晶体为伴孢晶体；②芽孢体：一般很难着色；

③苏云金芽孢杆菌菌：有游离芽孢，染成深红色的菱形蛋白结晶体。

0.5%碱性复红溶液微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置/℃/培养/小时。

0.5%碱性复红使用方法及现象：

0.5%碱性复红溶液相关产品：

产品货号	产品名称	产品规格	产品说明及用途
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HBPT8501-1	NAC液体培养基管（9ml） NAC Solid Medium	9ml*20	用于绿脓假单胞菌的增菌培养
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HB9223	枯草芽孢杆菌增菌培养基	250g	用于枯草芽孢杆菌增菌培养
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HB0277	硝酸盐肉汤Nitrate Broth	250g	用于蜡样芽孢杆菌硝酸盐还原试验
HB0278	动力-硝酸盐培养基（A法）Motility Nitrate Medium	250g	用于细菌的动力试验和硝酸盐还原试验
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HB0280	蜡样芽孢杆菌选择性琼脂基础Bacilus Cereus Selective Agar Base	250g	用于蜡样芽孢杆菌的选择性分离培养
HB0281	葡萄糖酪胨琼脂Dextrose Casein-peptone Agar	250g	用于食品中腊样芽孢杆菌鉴定和计数（APHA方法）
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1001339-1	脱纤维羊血Off fiber sheep blood	50ml	每100mlHB0251中加入7ml脱纤维羊血
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GB180	丙酸盐（枯草芽孢杆菌）	20支	用于枯草芽孢杆菌生化试验
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HB8480	肝汤Liver Broth	250g	用于嗜热菌芽孢的鉴别培养
HB8500	NAC琼脂培养基NAC Agar Medium	250g	用于绿脓假单胞菌的分离培养
HB8501	NAC液体培养基NAC Solid Medium	250g	用于绿脓假单胞菌的增菌培养
HB8538	NGKG寒天基础培地NGKG Medium	250g	用于食品中蜡样芽孢杆菌分离培养
HB8699a	0.1%溶菌酶溶液	1ml*5	每支添加于99ml溶菌酶肉汤基础中
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HB8699-1	溶菌酶营养肉汤Lysozyme Nutrient Broth	250g	用于蜡样芽胞杆菌溶菌酶试验（GB4789.14-2014）
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GB008-1	动力培养基	20支/盒	用于蜡样芽胞杆菌的检测（SN标准）
HBPM0252	酪蛋白琼脂平板（9cm)Casein Agar Plate	9cm*10个/包	用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验
HB0115-1	西蒙氏柠檬酸盐培养基Simmons Citrate Medium	250g	用于蜡样芽孢杆菌利用柠檬酸盐试验

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《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》解读

适用范围

本标准规定了食品微生物学检验中培养基和试剂的质量控制要求，适用于食品安全监管机构、检测实验室对微生物检测试剂的制备与验证，包含0.5%碱性复红溶液的配制与质控[4]。

核心检测方法

染色步骤

0.5%碱性复红溶液用于蜡样芽孢杆菌蛋白质毒素结晶试验，通过加热染色（微见蒸气）1-2分钟，观察菱形结晶体的显色反应，区分苏云金芽孢杆菌与其他芽孢杆菌[4][5]。

检出限与定量限

灵敏度要求

染色液需确保对目标菌株（如蜡样芽孢杆菌）的伴孢晶体显色清晰，检出限需满足单菌落水平检测需求，定量限未明确但需符合染色液稳定性指标[4][7]。

质控样品要求

保存与验证

染色液需避光保存于2℃-8℃，开封后需标注有效期（通常≤6个月）；使用前需通过阳性菌株（如苏云金芽孢杆菌）验证染色效果[4][7]。

关键实验步骤

配制与灭菌

取0.5g碱性复红溶解于20mL乙醇后定容至100mL，过滤除菌；避免高温灭菌以免成分分解[4][7]。

特别说明

干扰因素

染色时间过长可能导致背景色过深，需严格控制加热温度（微见蒸气）；陈旧培养物需延长室温放置时间至3-4天以提高检测灵敏度[4][5]。

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