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凝结芽孢杆菌计数培养基/用于凝结芽孢杆菌的计数培养

HB8925

Coagulation Bacillus Count Medium

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250g

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见证书

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凝结芽孢杆菌计数培养基介绍：

用途：用于凝结芽孢杆菌的计数培养。成分(g/L)

牛肉浸粉	10.0
葡萄糖	18.0
磷酸氢二钾	1.8
硫酸镁	1.0
琼脂	14.0
pH值7.0±0.1	25℃

用法：

称取本品44.8g,加热煮沸溶解于1000ml蒸水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。

注：培养基中含少量硫酸镁，灭菌后可能出现微量沉淀。

凝结芽孢杆菌计数培养基微生物灵敏度试验:

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置40℃需氧培养24-48小时。

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HB0280	蜡样芽孢杆菌选择性琼脂基础Bacilus Cereus Selective Agar Base	250g	用于蜡样芽孢杆菌的选择性分离培养
HB0281	葡萄糖酪胨琼脂Dextrose Casein-peptone Agar	250g	用于食品中腊样芽孢杆菌鉴定和计数（APHA方法）
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HB8699	溶菌酶肉汤基础Lysozyme Broth Base	250g	用于蜡样芽孢杆菌的溶菌酶试验
1001339-1	脱纤维羊血Off fiber sheep blood	50ml	每100mlHB0251中加入7ml脱纤维羊血
HB0249b	多粘菌素B（2.25万单位）	2.25万单位*5支	每支添加于225ml胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础中
HBJ016	含225mL胰酪胨大豆多粘菌素肉汤均质袋	10个/盒	用于蜡样芽孢杆菌的前增菌培养（GB)
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一、DB21/T 3278-2020 饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测

适用范围
适用于饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的定量检测，包括菌粉、菌剂等产品的活菌计数[8]。

核心检测方法
采用稀释涂布法与选择性培养基（含酵母粉、葡萄糖、蛋白胨等成分）结合，通过热处理消除杂菌干扰，实现芽孢特异性计数[7][8]。

检出限与定量限
检出限为1.0×10³ CFU/g，定量范围为1.0×10³~1.0×10⁹ CFU/g，需选择适宜稀释梯度进行计数[8]。

质控样品要求
需包含阳性对照（已知浓度凝结芽孢杆菌标准菌株）和空白对照，每批次样品至少重复3次平行测试[8]。

关键实验步骤
1. 样品预处理：无菌生理盐水振荡均质；
2. 热处理：75℃水浴30分钟灭活营养体；
3. 梯度稀释：采用蛋白胨水进行10倍系列稀释；
4. 涂布培养：选择液化GYE琼脂培养基，50℃倾注后37℃厌氧培养48小时[5][8]。

特别说明
需调节样品悬浮液pH至8.5±0.2以优化芽孢分散性，培养基中需添加L-半胱氨酸盐酸盐抑制需氧菌生长[7][8]。

二、QB/T XXXX—XXXX 凝结魏茨曼氏菌计数方法（征求意见稿）

适用范围
拟规定食品、保健品中凝结魏茨曼氏菌（原凝结芽孢杆菌）的计数方法，适用于含芽孢的固态与液态产品[2][3]。

核心检测方法
基于耐热性特征，采用热处理结合MRS改良培养基，通过菌落形态和镜检确认目标菌[2][3]。

检出限与定量限
预设最低检出限为100 CFU/g，定量上限为10¹⁰ CFU/g，稀释梯度需覆盖全范围[3]。

质控样品要求
要求使用ATCC标准菌株作为阳性对照，每稀释度设置双平板[3]。

关键实验步骤
1. 样品均质：含吐温80的缓冲液分散芽孢；
2. 选择性培养：45℃预还原培养基抑制杂菌；
3. 菌落验证：过氧化氢酶试验与显微观察芽孢[2][3]。

特别说明
强调需采用显微形态学确认芽孢纯度，避免与蜡样芽孢杆菌交叉误判[3]。

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