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胰酪胨大豆羊血（TSSB）琼脂/用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试实验

HB0251-1

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250g

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胰酪胨大豆羊血（TSSB）琼脂介绍：

用途：用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试实验。

添加剂：每瓶需配套添加 1001339-1 脱纤维羊血使用。

成分（g/L）

胰酪胨	15.0
植物蛋白胨	5.0
氯化钠	5.0
无水磷酸氢二钾	2.5
葡萄糖	2.5
琼脂	12.0
PH值7.2±0.2	25℃

检验原理：胰酪胨、植物蛋白胨在培养基中作为营养物质提供菌体生长所需的碳源、氮源、维生素及矿质元素等；无水磷酸二氢钠作为pH缓冲体系；琼脂作为凝固剂；脱纤维羊血提供红细胞，检测微生物溶血特性。

用法：

称取本品42.0g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装，每瓶100ml，121℃高压灭菌15分钟，冷至45－50℃时,加入5-10ml无菌脱纤维羊血，混匀后倾注平板，备用。

质量控制和典型特征：

在30-32℃培养18-24小时，蜡样芽孢杆菌典型特征为在菌落周围呈现β型完全溶血的溶血环。

胰酪胨大豆羊血琼脂基础微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置30±1℃需氧培养24±2小时。

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GB 4789.14-2014 食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验

适用范围	适用于食品中蜡样芽孢杆菌的分离、培养及溶血特性检测，尤其针对其β-溶血现象的观察[8]。
核心检测方法	采用胰酪胨大豆羊血琼脂培养基，通过菌落形态、溶血环特征（β-溶血）及生化试验（如葡萄糖分解、硝酸盐还原）进行鉴定。
检出限与定量限	最低检出限为1 CFU/g，定量范围通常为10⁴-10⁶ CFU/g，具体取决于样品预处理方法。
质控样品要求	需接种蜡样芽孢杆菌ATCC11778（β-溶血阳性）、覃状芽孢杆菌ATCC10206（弱溶血）及巨大芽孢杆菌ATCC14581（无溶血）作为质控菌株[1]。
关键实验步骤	1. 培养基制备：45g干粉溶解于1L蒸馏水，121℃灭菌15分钟 2. 冷却至45-50℃加入5%-10%无菌脱纤维羊血 3. 倾注平板（18-20ml/皿） 4. 30±1℃需氧培养24±2小时[1]
特别说明	羊血添加需严格控温（45-50℃），防止溶血成分失活；培养基PH值需维持在7.2±0.2[1]。

SN/T 0176-2013 进出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法

适用范围	针对进出口食品中蜡样芽孢杆菌的检验，特别强调溶血试验的标准化操作及结果判读[8]。
核心检测方法	规定使用TSSB琼脂进行初筛，结合动力试验、硝酸盐还原试验等确认菌株特性。
质控样品要求	要求每批次培养基需用标准菌株验证溶血性能，并记录溶血环直径（β-溶血环≥2mm为阳性）。
关键实验步骤	1. 样品均质后30℃预增菌6小时 2. 划线接种TSSB平板 3. 定量检测时需进行10倍系列稀释 4. 溶血观察需在培养后立即进行
特别说明	进出口检验需额外增加生物安全试验，排除潜在致病性菌株；培养基有效期开封后不得超过1个月。

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