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TCBS琼脂/用于致病性弧菌的选择性分离

HB4130

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250g

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TCBS琼脂介绍：

用途：用于致病性弧菌的选择性分离。

成分(g/L)

酵母浸粉	5.0
蛋白胨	10.0
硫代硫酸钠	10.0
枸橼酸钠	10.0
牛胆粉	5.0
牛胆酸钠	3.0
蔗糖	20.0
氯化钠	10.0
柠檬酸铁	1.0
溴麝香草酚兰	0.04
麝香草酚兰	0.04
琼脂	15.0
pH值8.6±0.2	25℃

检验原理：

蛋白胨、酵母浸粉在培养基中作为基础营养物质提供菌体生长所需的氮源、碳源及维生素等各种生长因子；较高浓度的氯化钠满足弧菌嗜盐生长的需要；蔗糖作为可发酵碳源；枸橼酸钠、高pH 碱性环境及硫代硫酸钠的存在抑制肠道菌的生长，牛胆粉、牛胆酸钠主要抑制革兰氏阳性菌的生长，此外，硫代硫酸钠还提供硫源，在柠檬酸铁存在的条件下可以检测细菌产硫化氢；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰作为酸碱指示剂；琼脂起凝固的作用。在该平板上生长的细菌如果能利用蔗糖产酸, 则使得混合指示剂( 溴麝香草酚兰和麝香草酚兰) 的颜色变成黄色。

用法：

称取本品8.9g，煮沸溶解于100ml蒸馏水中，冷至50℃时，倾入无菌平皿，备用。注：无需高压灭菌。

不同细菌在TCBS琼脂上的生长特征：

副溶血性弧菌

蓝绿色斗笠状菌落，H₂S阴性

溶藻弧菌

黄色菌落，H₂S阴性

霍乱弧菌

黄色菌落，H₂S阴性

TCBS琼脂微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。

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一、适用范围

本标准（YY/T 1208-2013）适用于硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂培养基的生产与质量控制，主要用于肠道致病性弧菌的选择性分离，包括霍乱弧菌、副溶血性弧菌等，适用于食品、医疗及环境卫生领域的微生物检测[1]。

二、核心检测方法

1. 理化试验：检测培养基的pH值（8.6±0.2）、水分含量（≤5%）、外观颜色（蓝绿色）及装量符合性。
2. 微生物生长试验：通过接种质控菌株（如副溶血弧菌ATCC 17802、大肠埃希氏菌ATCC 25922）验证选择性分离能力，观察菌落形态与生长抑制效果[1]。

三、检出限与定量限

本标准未明确具体数值，但要求培养基需满足目标菌株（如霍乱弧菌）生长良好（≥50 CFU/平板），非目标菌（如大肠埃希氏菌）应完全抑制[1]。

四、质控样品要求

1. 质控菌株：包括副溶血弧菌（蓝绿色菌落）、非O群弧菌（黄色菌落）及抑制菌株（如金黄色葡萄球菌）。
2. 质控频次：每批次培养基需进行微生物生长试验验证[1]。

五、关键实验步骤

1. 配制：称取89g干粉溶于1L蒸馏水，煮沸溶解，冷却至50℃倾注平板。
2. 灭菌：禁止高压灭菌，避免成分破坏。
3. 接种：划线或涂布目标菌悬液，36±1℃培养18-24小时[1]。

六、特别说明

1. 贮存：未开封干粉需避光干燥保存（2-25℃），配制后平板需2-8℃密封保存且不超过4周。
2. 质控失败处理：若目标菌生长不良或抑制菌生长，应立即停用并追溯原料及工艺[1]。

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