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克氏双糖铁琼脂/用于细菌复合生化管试验（葡萄糖，乳糖）

HB6234

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250g

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克氏双糖铁琼脂介绍：

用途：用于细菌复合生化管试验（葡萄糖，乳糖）。

成分(g/L)

蛋白胨	20.0
牛肉粉	3.0
氯化钠	5.0
酵母粉	3.0
乳糖	10.0
葡萄糖	1.0
柠檬酸铁铵	0.5
硫代硫酸钠	0.5
琼脂	12.0
酚红	0.024
pH值7.4±0.2	25℃

检验原理：蛋白胨、牛肉粉和酵母粉提供氮源、维生素、矿物质；乳糖、葡萄糖为可发酵糖类，其产酸时通过酚红指示剂测出，酸性呈黄色，碱性呈红色；硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢，与铁盐生成黑色硫化铁；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

用法：

称取本品55g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装于试管内，3/4左右高度，121℃高压灭菌15分钟，放置高层斜面，备用。

注：培养基中含少量柠檬酸铁铵，灭菌后可能出现微量沉淀。

不同细菌在克氏双糖铁琼脂上的生长特征：

克氏双糖铁琼脂微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。

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一、适用范围

适用于肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）与大肠埃希菌的鉴别，通过观察细菌对乳糖、葡萄糖的发酵能力及硫化氢（H₂S）的产生情况[1][5]。具体用于临床样本、食品及环境样本中肠道杆菌的初步筛选。

二、核心检测方法

1. 穿刺接种法：底层穿刺接种观察细菌动力及葡萄糖发酵能力。
2. 斜面划线法：斜面划线观察乳糖发酵情况，通过酚红指示剂颜色变化（红色→黄色）判断产酸能力[1][3]。
3. H₂S检测：硫代硫酸钠与铁盐反应生成黑色硫化铁沉淀，判定H₂S产生[5]。

三、检出限与定量限

未明确检出限（LOD）与定量限（LOQ），实验结果以定性判断为主。需通过质控菌株（如大肠埃希菌ATCC 25922、沙门氏菌ATCC 14028）验证培养基灵敏度[5]。

四、质控样品要求

1. 阳性对照：沙门氏菌（斜面红色/底层黄色，H₂S阳性）。
2. 阴性对照：大肠埃希菌（斜面黄色/底层黄色，H₂S阴性）。
3. 培养基质控：每批次需验证凝固性、pH（7.4±0.2）及无菌性[5][6]。

五、关键实验步骤

1. 培养基制备：溶解蛋白胨、糖类等成分，校正pH后高压灭菌（121℃, 15min）。
2. 分装与凝固：分装试管形成高层斜面，避免气泡产生[1][6]。
3. 接种与培养：穿刺接种后，36±1℃培养18-24小时，观察结果[3][5]。

六、特别说明

1. 仅用于初步鉴别，需结合血清学或分子生物学方法确认。
2. 若斜面与底层均变黄，需进一步排除非目标菌（如变形杆菌）干扰。
3. 含酚红指示剂，避免长期暴露于光照导致褪色[1][5]。

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