抗生素检定培养基8号(USP标准)(Medium 8)/用于万古霉素效价测定的菌层培养基
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用途:用于万古霉素效价测定的菌层培养基
成分(g/L)
Peptone/蛋白胨
6.0 g
3.0 g
Beef Extract/牛肉浸粉
1.5 g
Agar/琼脂
15.0 g
pH after sterilization: 5.9 ± 0.1
检验原理:本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性有关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种微生物学方法。
用法:
Suspeng 25.5g/liter, heat up and milling to dissolve ,dispensein conical flask, autoclave at 121℃ for 15 min.
称取本品25.5g,加热溶解于1000ml纯化水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。
不同细菌在抗生素检定培养基8号(USP)(上的生长特征
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适用于去甲万古霉素等抗生素的效价及残留的微生物学检定,通过琼脂扩散法测定供试品与标准品的抑菌圈直径差异[2]。
采用琼脂扩散法,利用抗生素在培养基内的扩散作用,通过比较标准品与供试品对试验菌产生的抑菌圈大小,计算效价。试验菌悬液需预试加菌量,确保抑菌圈直径符合要求[2]。
二剂量法标准品高浓度溶液的抑菌圈直径范围为18~22mm,三剂量法中心浓度对应的抑菌圈直径为15~18mm,以此作为定量判定依据[2]。
需使用经标定的标准品与供试品进行平行试验,确保两者试验条件一致,包括培养基pH值(6.0±0.1)、菌层均匀性及培养温度[2]。
1. 培养基配制:22g培养基溶于1L蒸馏水,加热溶解后115℃灭菌30分钟;
2. 双碟制备:无菌条件下注入20mL底层培养基,凝固后加入菌层;
3. 菌层添加:预试菌悬液按优化量加入,确保抑菌圈清晰[2]。
操作需在无菌环境中进行,避免微生物污染;培养基融化建议使用水浴或微波加热,禁用直火;试验菌悬液保存及使用需符合生物安全规范[2]。
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