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硝酸盐还原试剂盒/用于硝酸盐还原试验

HB8282

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5ml*4

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见证书

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硝酸盐还原试剂盒介绍：

试剂盒组成：

组成	别名	规格	配制依据
溶液A	对甲基苯磺酸溶液	5ml*2	在1000mL 5mol/L乙酸中溶解8g对氨基苯磺酸
溶液B	α-萘酚乙酸溶液	5ml*2	在1000mL 5mol/L乙酸中溶解5g α-萘酚

反应原理：

蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、维生素和生长因子；某些细菌可利用硝酸盐产亚硝酸盐、氨或氮气。滴加硝酸盐还原试剂后若试验菌培养物中有亚硝酸盐，可与乙酸、对苯氨基苯磺酸和α-萘酚反应生成红色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若试验菌可利用硝酸盐产亚硝酸盐进一步转化为氮气，则小倒管中会有气体囤积，判定为阳性。若试验菌可将亚硝酸盐转化为氨，则滴加硝酸盐还原试剂呈无色反应，此时需加入适量锌粉证明培养物中是否有未被利用的硝酸盐存在，若加入锌粉后为无色则证明无硝酸盐，则可判断为阳性。试验菌不利用硝酸盐，滴加硝酸盐还原试剂后为无色，加入锌粉后变为红色，证明培养物中有未被利用的硝酸盐被锌粉还原为亚硝酸盐产生红色反应，此时判断为阴性。

操作步骤：

1.培养物接种于硝酸盐肉汤，36±1℃培养1-5天。

2.加入溶液A和溶液B各2-3滴，混匀。

3.立即观察结果，也可以放置室温2-5分钟观察结果。

结果判断：

阳性反应：红色。

阴性反应：不变色（无红色出现）

注：如出现阴性结果，可再加入锌粉少许，若出现红色，则鉴定为阴性结果，若不变色则为阳性结果。

硝酸盐还原试剂盒微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置/℃/培养/小时。

硝酸盐还原试剂盒相关产品：

产品货号	产品名称	产品规格	产品说明及用途
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HB0254	D-环丝氨酸	0.2g	每支过滤除菌后添加于500mlSC琼脂基础或500mlTSC中
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HB0310a	氯化血红素	1ml*5	作为 HB0310 CDC厌氧菌琼脂的添加剂
HB0310b	维生素K1（2mg）	1ml*5	作为 HB0310 CDC厌氧菌琼脂的添加剂
HB8775a	土霉素添加剂（冻干粉）	20mg*5支/盒	作为添加剂使用
HB7039b	TM 抑菌剂	2ml*5	作为HB7039TM培养基的添加剂使用
SN079	乳糖-明胶生化管	20支	用于产气荚膜梭菌的生化
HB8298-2	鞭毛染色液 Flagellum Staining Solution	5ml*8支	用于细菌鞭毛染色
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HB9119a	多粘菌素B（6万单位）Polycolisttin B	1ml*5支	用于HB9119含多粘菌素B、庆大霉素的BCSA琼脂的添加剂使用
HB8783	班氏试剂	5ml/支*2	用于检测是否还原糖

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一、适用范围

适用于微生物样本中硝酸盐还原酶（Nar）活性的定量检测，如环境监测、食品安全及科研领域中的微生物代谢分析。

二、核心检测方法

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）：通过固相抗体捕获目标酶，结合HRP标记抗体形成复合物，TMB显色后测定吸光度，计算酶活性浓度[1]。

三、检出限与定量限

检出限为3 U/L，定量范围为3–85 U/L（96T规格），线性相关系数≥0.99，适用于痕量至中高浓度样本的精准分析[1]。

四、质控样品要求

需同步检测阴性质控（空白对照）与阳性质控（标准品梯度）。质控样本OD值应在预期范围内，批内变异系数（CV）需≤15%[1]。

五、关键实验步骤

1. 包被：将纯化抗体固定于微孔板；
2. 加样：依次加入待测样本、酶标抗体；
3. 孵育：37℃避光反应60分钟；
4. 洗涤：去除未结合物质；
5. 显色：加入TMB底液，终止反应后读取OD值[1]。

六、特别说明

1. 避免反复冻融试剂，浓缩洗涤液需按比例稀释；
2. 显色时间需严格控制，终止后10分钟内完成读数；
3. 高浓度样本需预稀释，避免钩状效应[1]。

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