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烟酸测定用培养基(GB5009.89-2023标准)/用于微生物分析方法检测奶粉或食品中烟酸的含量

HB7019-2

Nicotinic Acid Assay Medium

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250g

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烟酸测定用培养基(GB5009.89-2023标准)介绍：

用途：用于微生物分析方法检测奶粉或食品中烟酸的含量。成分(g/L)

去维生素水解酪蛋白	12.0
葡萄糖	40.0
乙酸钠	20.0
磷酸二氢钾	1.0
磷酸氢二钾	1.0
DL-色氨酸	0.2
L-胱氨酸	0.4
盐酸腺嘌呤	0.02
盐酸鸟嘌呤	0.02
尿嘧啶	0.02
硫酸镁	0.4
氯化钠	0.02
硫酸亚铁	0.02
硫酸锰	0.02
核黄素	0.0004
对氨基苯甲酸	0.0002
盐酸吡哆醇	0.0004
盐酸硫胺素	0.0002
泛酸钙	0.0002
生物素	0.0000008
pH6.8±0.2	25℃

用法：

称取本品7.5g,加热溶解于100ml蒸馏水中,煮沸2-3分钟分装试管,每管5ml,(平均分配混浊物),加入标准品或测试样品,补蒸馏水至试管中,使试管中液体体积为10ml ,121℃高压灭菌5分钟后，迅速冷却,备用。

注：培养基中含多种维生素类成分，灭菌后有沉淀，分装时需搅拌均匀。

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GB 5009.89-2023标准解读

适用范围

第一法（高效液相色谱法）适用于调制乳粉、特殊膳食用食品（不包括部分水解配方及氨基酸代谢障碍配方食品）和特殊用途饮料中烟酸和烟酰胺的测定。第二法（微生物法）适用于各类食品中烟酸或烟酰胺的测定[3][6]。

核心检测方法

1. 第一法（高效液相色谱法）：样品经酶解、蛋白质沉淀后，在弱酸性条件下超声提取，采用C18色谱柱分离，紫外检测器定量分析。
2. 第二法（微生物法）：通过植物乳杆菌（ATCC 8014）对烟酸的特异性生长反应，采用微孔板法或传统微生物法测定光密度值[4][6]。

检出限与定量限

1. 高效液相色谱法：检出限为0.1 mg/kg，定量限为0.3 mg/kg。
2. 微生物法：定量限为0.5 μg/100g，标准曲线浓度范围优化为0.05-0.5 ng/mL[5][6]。

质控样品要求

1. 每批次需包含空白对照、基质加标样品和平行样。
2. 微生物法需使用标准菌株（如ATCC 8014），并定期验证菌株活性[6][8]。

关键实验步骤

1. 样品前处理：酶解（酸性磷酸酶/淀粉酶）→蛋白质沉淀（硫酸锌/氢氧化钠）→pH调节至4.5±0.1。
2. 色谱条件：流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（pH 3.0），流速1.0 mL/min，检测波长261 nm[3][5]。

特别说明

1. 微生物法新增微孔板技术，需严格控制培养温度（37±0.5℃）和振荡频率。
2. 含乳蛋白深度水解配方的特殊医学用途食品需采用第一法检测[4][6]。

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