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蛋白胨水(色氨酸肉汤)介绍:

用途:用于细菌的靛基质实验。

检验原理:

蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;含有色氨酸酶的细菌,能分解蛋白胨中的色氨酸,形成靛基质(吲哚)。靛基质无色,当加入对氨基苯甲酸试剂后,形成可见的红紫色醌式化合物,即玫瑰靛基质。

试验方法:

将培养物接种蛋白胨水,36±1℃培养24±2h后,加Kovacs靛基质试剂(此试剂需另行购买)

0.2-0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。

结果判断:

编号

产品名称

结果判断

培养时间

备注

阳性

阴性

GS001

蛋白胨水(色氨酸肉汤)

红色环

黄色环

18-24

培养结束后需滴加Kovacs靛基质试剂2-3滴,

观察结果。 

不同细菌在蛋白胨水(色氨酸肉汤)上的生化反应现象:

蛋白胨水(色氨酸肉汤)微生物灵敏度试验:

接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。 

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国家标准解读
标准名称及标准号GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
适用范围适用于食品、食品加工环境及样品中沙门氏菌的定性检测。
核心检测方法前增菌培养(缓冲蛋白胨水)、选择性增菌(TTB和SC肉汤)、分离培养(BS琼脂和XLD琼脂)、生化鉴定(包括色氨酸肉汤吲哚试验)。
检出限与定量限定性检测,25g样品中检出限为1 CFU。
质控样品要求需同步进行阳性对照(沙门氏菌标准菌株)和阴性对照(无菌生理盐水)。
关键实验步骤色氨酸肉汤用于吲哚试验:接种可疑菌落于蛋白胨水(色氨酸肉汤),37℃培养24小时后,滴加柯氏试剂,阳性反应呈红色环。
特别说明沙门氏菌吲哚试验通常为阴性,需结合其他生化反应(如尿素酶、赖氨酸脱羧酶)综合判定。
国家标准解读
标准名称及标准号GB 4789.36-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验
适用范围适用于食品及环境样本中大肠埃希氏菌O157:H7/NM的检测。
核心检测方法免疫磁珠富集、选择性培养基分离(CT-SMAC琼脂)、生化鉴定(色氨酸肉汤吲哚试验等)。
检出限与定量限25g样品中检出限为1 CFU。
质控样品要求需使用O157:H7标准菌株作为阳性对照,并监控培养基性能。
关键实验步骤吲哚试验:接种可疑菌落于蛋白胨水,37℃培养18-24小时,阳性结果为红色环(O157:H7通常为吲哚阳性)。
特别说明需结合山梨醇发酵试验(O157:H7不发酵山梨醇)及血清学凝集试验确认。
行业标准解读
标准名称及标准号SN/T 1870-2016 出口食品中致病菌检测方法 实时荧光PCR法
适用范围适用于食品中沙门氏菌、志贺氏菌等的快速筛查。
核心检测方法基于特异性基因的实时荧光PCR技术,需结合前增菌培养(如蛋白胨水)。
检出限与定量限纯菌DNA检测限为1-10 CFU/反应,实际样品检测限为10-100 CFU/g。
质控样品要求需包含阳性对照、阴性对照及内标对照,防止假阴性/阳性。
关键实验步骤增菌培养后提取DNA,设计特异性引物探针(如沙门氏菌invA基因),进行PCR扩增及结果判读。
特别说明阳性结果需进一步通过传统培养法(含生化试验)确认。

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