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胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础(TSC)/用于产气荚膜梭菌的平板计数（GB标准）

HB0253-9

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250g

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胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础(TSC)介绍：

用途：用于产气荚膜梭菌的平板计数

添加剂：每瓶需配套添加 5盒 HB0253a D-环丝氨酸溶液或 4g HB0254 D-环丝氨酸使用，每支HB0253a添加于100mlTSC，每支HB0254添加于500mlTSC。。

成分(g/L)：

胰胨	15.0
大豆胨	5.0
酵母粉	5.0
焦亚硫酸钠	1.0
柠檬酸铁铵	1.0
琼脂	15.0
pH值7.6 ± 0.2	25℃

检验原理：胰胨、大豆胨和酵母粉提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；焦亚硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；D-环丝氨酸抑制非梭菌的细菌。

用法：

称取本品47.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装于 500ml 烧瓶中,每瓶250ml,121℃高压灭菌 15 分钟。冷至 50±1℃时,每250ml 培养基中,加入过滤除菌的 0.5% D-环丝氨酸溶液 20ml,混匀,备用。

注：培养基中含少量柠檬酸铁铵，灭菌后可能出现微量黑色沉淀，摇匀使用即可。

产气荚膜梭菌在TSC上的生长特征：

胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础(TSC) 微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃厌氧培养20-24小时。

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一、适用范围

适用于食品、饮用水及临床样本中产气荚膜梭菌的分离和计数，依据食品安全国家标准GB 4789.13《食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验》进行检测[1][6]。

二、核心检测方法

采用平板计数法：样品经稀释后接种于TSC琼脂，厌氧培养后计数典型黑色菌落。培养基中的焦亚硫酸钠和柠檬酸铁铵与细菌代谢产物反应形成黑色沉淀，D-环丝氨酸抑制非目标菌生长[3][6]。

三、检出限与定量限

检出限为1 CFU/g（或mL），定量限为10 CFU/g（或mL），依据GB 4789.13要求设定，需通过空白对照和低浓度样品验证灵敏度[1]。

四、质控样品要求

1. 阳性对照：产气荚膜梭菌标准菌株（如ATCC 13124）应形成典型黑色菌落；
2. 阴性对照：添加非目标菌（如大肠杆菌）应无生长；
3. 每批次需包含10%平行样，结果偏差≤15%[3][6]。

五、关键实验步骤

1. 培养基配制：每250mL基础培养基添加1支0.5% D-环丝氨酸溶液，50℃水浴混匀后倾注平板；
2. 厌氧培养：35-37℃厌氧环境培养24-48小时；
3. 结果判读：典型菌落为黑色中心，周围有乳白色晕圈[1][3]。

六、特别说明

1. D-环丝氨酸需现用现配，过滤除菌后加入冷却至50℃的培养基；
2. 卵黄乳液需无菌操作制备，4℃保存不超过7天；
3. 培养基pH严格控制在7.6±0.2，偏差过大会影响选择性[3][6]。

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