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强化梭菌鉴别琼脂（DRCA）/用于食品和其它物质中梭菌的培养和计数

HB0285

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250g

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见证书

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强化梭菌鉴别琼脂（DRCA）介绍：

用途：用于食品和其它物质中梭菌的培养和计数。

成分（g/L）

牛肉浸粉	8.0
胰酪蛋白胨	5.0
蛋白胨	5.0
酵母浸粉	1.0
葡萄糖	1.0
可溶性淀粉	1.0
醋酸钠	5.0
L-半胱氨酸盐酸盐	0.5
柠檬酸铁铵	0.5
亚硫酸钠	0.75
刃天青	0.002
琼脂	15.0
pH值7.6±0.2	25℃

检验原理：

胰酪蛋白胨，牛肉浸粉，蛋白胨，可溶性淀粉，酵母浸粉和L-半胱氨酸盐提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；刃天青是氧化还原指示剂；醋酸钠可抑制革兰氏阴性菌；柠檬酸铁铵和亚硫酸钠是硫化氢指示剂；琼脂是培养基凝固剂。

用法：

称取本品42.75g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装试管，121℃高压灭菌15分钟，备用。

注：培养基中含淀粉、柠檬酸铁，灭菌后可能出现微量沉淀。

产气荚膜梭菌在强化梭菌鉴别琼脂（DRCA）上的生长特征：

强化梭菌鉴别琼脂（DRCA）微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃厌氧培养24-48小时。注：回收率计算时，用TSC琼脂做对照培养基。

强化梭菌鉴别琼脂（DRCA）相关产品：

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HB9007-1	卵黄琼脂培养基Egg Yolk Agar Medium	250g	用于肉毒梭菌的分离培养
HB8518-1	GAM培养基Gifu Anaerobic Medium	250g	用于厌氧菌的培养
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HB0253	胰䏡-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础（TSC）Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base	250g	用于产气荚膜梭菌的平板计数(SN标准)因标准更新，停止生产，请采购HB0253-9
HBPT0283	含铁牛乳培养基管（10ml）Iron Milk Medium Tube	10ml*20支	用于产气荚膜梭菌的牛奶发酵试验

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一、适用范围

本标准适用于食品、药品、环境样本中梭菌属（如产气荚膜梭菌）的分离、鉴别及定量检测，尤其针对厌氧条件下生长的梭菌进行选择性培养[2][8]。

二、核心检测方法

采用倾注培养法：样品经增菌处理后，取1ml稀释液与冷却至50℃的DRCA培养基混合，双层琼脂覆盖后厌氧培养24-48小时，通过黑色菌落特征和硫化氢反应进行鉴别[2]。

三、检出限与定量限

检出限为20 CFU/g（基于质控菌株验证），定量范围20-200 CFU/平板，菌落回收率（PR）≥0.7时判定为有效定量[2][8]。

四、质控样品要求

需同步接种产气荚膜梭菌ATCC13124（B型/D型）及阴性对照菌株（如大肠杆菌ATCC25922），菌液浓度控制在20-200 CFU/平板，质控菌株在36±1℃培养后应呈现典型黑色菌落特征[2][8]。

五、关键实验步骤

1. 培养基制备：42.75g干粉溶解于1000ml蒸馏水，121℃灭菌15分钟
2. 样品处理：按1:9比例接种增菌液，37℃培养18-24小时
3. 双层接种：首层混合15ml培养基与样品液，凝固后再覆盖10ml培养基
4. 厌氧培养：正置于厌氧装置，36±1℃培养24-48小时[2][8]

六、特别说明

1. 培养基pH需严格控制在7.6±0.2（25℃测定）
2. 刃天青指示剂变红表明氧化环境异常，需重新制备培养基
3. 柠檬酸铁铵与亚硫酸钠反应产生的黑色沉淀为特征判定指标
4. 本方法需结合生化试验或分子鉴定进行最终确认[2][8]

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