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胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础（TSC）（颗粒）/用于产气荚膜梭菌的计数和培养

HBKP0253-9

Tryptose-Sulfite-Cycloserine Agar Base

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250g

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胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础（TSC）（颗粒）介绍：

用途：用于产气荚膜梭菌的计数和培养。

添加剂：

每瓶需配套添加5盒 HB0253a D-环丝氨酸溶液或4g HB0254 D-环丝氨酸使用，每支HB0253a添加于100mlTSC，每支HB0254添加于500mlTSC。

成分(g/L)

胰胨	15.0
大豆胨	5.0
酵母浸粉	5.0
焦亚硫酸钠	1.0
柠檬酸铁铵	1.0
琼脂	15.0
pH值7.6±0.2	25℃

检验原理：胰胨、大豆胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；焦亚硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；琼脂是培养基的凝固剂；D-环丝氨酸抑制非梭菌的细菌。

用法：

称取本品47.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装于500ml烧瓶中，每瓶250ml，121℃高压灭菌15分钟。冷至50±1℃时，每250ml培养基中，加入过滤除菌的0.5% D-环丝氨酸溶液 20ml，混匀，备用。

注：也可100ml培养基中加入1支HB0253a D-环丝氨酸溶液。

注：培养基中含少量柠檬酸铁铵，灭菌后可能出现微量黑色沉淀，摇匀使用即可。

产气荚膜梭菌在TSC上的生长特征：

胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础（TSC）（颗粒）微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置36±1℃厌氧培养20-24小时。

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本公司销售的所有产品仅供实验科研使用，不用于人体及临床诊断。

标准名称及标准号

GB 4789.13-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验》

适用范围

适用于食品、环境样品及临床标本中产气荚膜梭菌的分离、计数与鉴定，包括使用TSC琼脂进行选择性培养和菌落特征观察。

核心检测方法

1. 样品稀释后接种至TSC琼脂，通过亚硫酸盐还原反应和环丝氨酸抑制杂菌的特性进行选择性培养。
2. 厌氧条件下（36±1℃, 20-24h）培养后观察黑色菌落，并进行确证试验（动力试验、硝酸盐还原试验）。

检出限与定量限

定量检测时报告单位为CFU/g（或CFU/mL），检出限为10 CFU/g；若采用MPN法则报告MPN值，检出限根据稀释梯度确定。

质控样品要求

1. 阳性对照：产气荚膜梭菌标准菌株（如ATCC 13124）应形成典型黑色菌落。
2. 阴性对照：培养基无菌落生长或仅有非目标菌落（需验证环丝氨酸抑制作用）。

关键实验步骤

1. TSC琼脂配制需严格控制温度（45-50℃倾注），避免环丝氨酸失效。
2. 厌氧培养时需使用专用罐或培养袋，确保氧气浓度≤1%。
3. 菌落计数需在培养后4小时内完成，避免黑色褪色干扰。

特别说明

1. TSC琼脂基础需添加D-环丝氨酸溶液（终浓度400 μg/mL）并充分混匀。
2. 若样品中杂菌过多，建议增加加热处理（80℃, 10min）以杀死非芽孢菌。
3. 典型菌落需经革兰染色（短粗革兰阳性杆菌）及生化试验确证。

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