志贺氏菌显色培养基/用于志贺氏菌显色培养
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志贺氏菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基,用于食品、病人粪便样品中志贺氏菌的快速检测。志贺氏菌显白色或无色,有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心;大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色;沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心;其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长;是一种很理想的快速检测培养基。
成份 (g/L)
特殊营养物质
70.2
混合显色剂
0.4
琼脂
15.0
pH 7.3±0.1 25℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 17.12g 加入200ml蒸馏水,加热煮沸溶解并不停搅拌,加热1分钟左右。冷却至45-50℃时,倾入无菌平皿。注意:制备好的培养基注意保持表面干燥,可在36±1℃的培养箱中倒置放置1-2小时。
贮存
制备好的平板可保存 2-5 天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8 ℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1、按GB标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;2、取25克样品液加入225ml GN增菌液或志贺氏菌增菌肉汤中,按标准规定时间增菌培养; 3、用3mm接种环取1环增菌液,划线接种到志贺氏菌显色培养基上,做2个平板; 4、36±1℃培养20-24h,志贺氏菌显白色或无色,有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心;大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色;沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心;其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长; 5、对典型菌落做全套生化试验和志贺氏菌血清学试验。
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈灰白色至淡粉色。制备好的平板呈红色固体培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃培养 20 ~ 24h 小时:
质控菌株
菌株号
生长情况
菌落颜色
福氏志贺氏菌
ATCC12022
+++
白色或无色,菌落直径1-3mm
痢疾志贺氏菌
CMCC51252
+++
白色或无色,菌落直径1-3mm
鲍氏志贺氏菌
CMCC51582
+++
白色或无色,菌落直径1-3mm
宋内氏志贺氏菌
CMCC 51592
+++
白色或无色,菌落直径1-3mm,有蓝色中心
金黄色葡萄球菌
ATCC25923
-
/
大肠杆菌
ATCC25922
+++
绿色菌落
沙门氏菌
ATCC14028
+++
无色菌落且黑色中心
奇异变形杆菌
ATCC12453
-/+
无色,菌落直径<1mm
肺炎克雷伯氏菌
ATCC10031
++
绿色菌落
弗氏柠檬酸盐杆菌
ATCC43864
+++
绿色菌落
铜绿假单胞菌
CICC10211
-/+
无色,菌落直径<1mm
方法的局限性
本培养基上的典型志贺氏菌必须做生化试验或血清学试验。
检验原理:
利用非志贺氏菌的特异性的酶,使其与酶底物结合形成不同颜色的菌落,而生化特性反应不活跃的志贺氏菌经22~28h培养后,则形成易于识别的白色-粉红色(与培养基颜色相近)的菌落。志贺氏菌呈白色/清晰的菌落,大小约为1~3mm,周围培养基变红。
典型特征
志贺氏菌显白色或无色,有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心;大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色;沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心;其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长。
不同细菌在志贺氏菌显色培养基上的生长特征:
福氏志贺氏菌CMCC51572
白色或无色,菌落直径1-3mm
痢疾志贺氏菌CMCC51105
白色或无色,菌落直径1-3mm
宋内志贺氏菌CMCC51592
白色或无色,菌落直径1-3mm,有蓝色中心
大肠埃希氏菌ATCC25922
绿色菌落
肺炎克雷伯氏菌ATCC10031
绿色菌落
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2. 样品前增菌处理;
3. 36±1℃倒置培养20-24小时[2][6][9]。
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